如何正确使用DPPH法总抗氧化能力测试剂盒

DPPH法总抗氧化能力测试剂盒的正确使用，需严格遵循试剂配制、样本处理、反应测定的规范流程，避免操作误差影响结果准确性，以下是标准化操作指南：
一、实验前准备
试剂核对：开箱核对试剂盒内试剂、耗材是否齐全，确认所有试剂在有效期内。
自备材料：提前准备无水乙醇、可见分光光度计/酶标仪、96孔板、离心机等必备器材。
预实验验证：选取2-3个预期差异大的样本做预实验，确定合适的样本稀释比例，避免超出检测范围。
二、试剂配制
DPPH粉剂需用无水乙醇溶解，按说明书配制成0.1-0.2mmol/L的工作液，现配现用，全程避光操作。
阳性对照试剂（维生素C或Trolox）按需梯度稀释，用于后续验证实验体系可靠性。
三、样本处理
液体样本过滤或离心去除杂质，固体/组织样本用对应提取液浸提，离心取上清待测。
若预实验显示样本清除率>90%，需进一步稀释样本；清除率<5%则适当提高样本浓度。
四、反应与测定
取等体积DPPH工作液与样本溶液混合，室温避光孵育30min。
在515-517nm波长下测定各组吸光度，设置空白对照组扣除溶剂、样本自身的吸光干扰。
五、结果计算与收尾
按公式计算DPPH自由基清除率：清除率(%)=(A对照-A样本)/A对照×100%，结合阳性对照换算得到总抗氧化能力数值。
每组设置3次平行重复，实验后按规范处理含DPPH的废液，避免环境污染。
六、关键注意事项
全程使用棕色容器或铝箔包裹试剂，避免DPPH见光分解失效。
若DPPH溶液变为浅黄或浑浊，需立即重新配制，不可继续使用。
避免样本中含高浓度去垢剂、还原剂，防止干扰氧化还原反应体系。