如何判断C1q抗体ELISA是否优化成功

判断C1q抗体ELISA优化是否成功，关键看这五个核心指标是否达标：
一、灵敏度验证
?标准品梯度稀释?：用合成DNA或标准菌株做5个数量级稀释（如10?–101 copies/mL），每个浓度做3次重复。
?Ct值判断?：Ct值<40且扩增效率E在0.9–1.1之间为阳性。
?实际样本测试?：用血浆/血清样本验证，避免基质效应干扰。
二、特异性验证
?交叉反应测试?：用非目标蛋白（如其他补体蛋白）做实验，确保无交叉反应。
?抗体特异性?：通过BLAST比对确认抗体仅识别C1q蛋白。

三、重复性验证

?板内CV?：同一板内重复检测，CV<10%。
?板间CV?：不同板间检测，CV<10%。
?标准偏差?：同一浓度样本多次检测，标准偏差≤0.2。
四、线性范围验证
?标准曲线?：R2>0.98表示线性良好。
?动态范围?：检测范围通常为6–7个数量级（如101–10? copies/mL）。
五、实际应用验证
?样本基质?：确保试剂盒适用于血浆、血清等样本。
?质控品设置?：阳性、阴性、无模板对照验证反应有效性。
?优化成功标志?：所有指标达标，且实际样本检测结果与理论值一致。