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宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒(磁珠法)
  • 品牌:联祖
  • 发布日期: 2022-10-14
  • 更新日期: 2024-05-29
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品牌 联祖
纯度 %
宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒(磁珠法)
试剂盒简介:

宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒(磁珠法)用于样本的前处理,可稳定高效地提 取出样本中残留的痕量宿主 DNA。

试剂盒组分:
序号 试剂 规格 储存条件





1 裂解液 15ml×1 瓶




室温
结合液(异丙醇) 空瓶
洗涤液 40ml×2 瓶
样本稀释液 15ml×1 瓶
5M NaCl 1ml×1 管
蛋白酶 K 1ml×1 管
磁珠 6ml×1 瓶
洗脱液 10ml×1 瓶

2 肝糖原 1ml×1 管 -20oC
tRNA 50ul×1 管
有效期: 12 个月
实验所需但试剂盒未包含成分:

? 无水乙醇
? 异丙醇
? 一次性手套
? 1.5ml 离心管
? PCR 管
? 1000ul 、100ul 、10ul 无菌滤芯低吸附移液枪头

相关设备:

? 离心机
? 涡旋振荡器
? 旋转混匀器
? 磁力架
? 恒温水浴锅或金属浴

? 1000ul 、100ul 、10ul 、2.5ul 移液器

实验操作细则:

一、 样本处理:
1.   取 100ul 待检样本至 1.5ml 干净的离心管中,加入 10ul 5M  NaCl  溶液,用涡旋      振 荡器充分震荡 10 秒;
2.   加入 10ul 蛋白酶 K,在涡旋振荡器上充分震荡 10 秒;
3.   配制新鲜的裂解液,其组成为: 130ul  裂解液/100ul  样本, 9ul  肝糖原/100  样本, 0.2ul tRNA/100ul 样本,充分混匀以制成新鲜配制的裂解液;
4.  将 139ul 新鲜配制的裂解液加入到样本管中, 然后用涡旋振荡器充分震荡 10 秒, 取出短 暂快速离心 5 秒,然后放置在 56oC 孵育 30 分钟;
二、 DNA 捕获:
1.     将磁珠充分涡旋振荡以完全重悬;
2.     将样本管从孵育器中取出, 进行简短的离心,将液体收集到管底,然后加入完全重悬的 磁珠 60ul 和 230ul 结合液,在涡旋振荡器上充分震荡 10 秒; (注意: 在加入磁珠时, 需经 常振荡重悬磁珠, 以保证吸取时磁珠的均匀性。建议每加 3-4 组样本后, 重悬磁珠后再进行 后续样本的添加)
3.     将震荡后的样本管,置于旋转混匀器或涡旋振荡器上 10 分钟以进行磁珠捕获;
4.     将样本管从旋转混匀器上取下,在 10000g 的条件下离心 1 分钟使磁珠充分聚集;
5.     将离心后的样本管置于磁力架上, 待溶液完全澄清后, 用枪头小心移去上清(注: 避免 枪头搅动磁珠,使得磁珠同上清一起被除去从而影响得率);
三、 洗涤:
1.     样本管移去上清后,不必将样本管从磁力架上取下,直接加入 400ul 洗涤液;
2.     待溶液完全澄清后,磁珠完全分离,用枪头小心移去上清;


3.     保持样本管在磁力架上, 加入 400ul 洗涤液, 待溶液澄清, 磁珠完全分离后, 用枪头小 心移去上清;
4.     将样本管从磁力架上取下, 于 10000g 的条件下离心 30 秒,使得残留的洗涤液完全聚集 到管底;
5.     将样本管置于磁力架上,待磁珠完全分离后,用 10ul 枪头小心移除残留的液体;
6.     将样本管从磁力架上取下,置于 70oC 金属浴中,放置 4 分钟, 除去残留的乙醇(注: 若干燥不够, 残留的乙醇会影响后续的定量检测反应);待磁珠团出现裂纹时,将样本管从 金属浴中取出进行 DNA 洗脱;
四、 DNA 洗脱:
1.     沿着样本管的管壁加入 50- 100ul 洗脱液,用 100ul 的枪头反复吹吸,以完全重悬磁珠;
2.     将样本管置于 70oC 孵育器孵育 10 分钟;
3.     将样本管从孵育器中取出,于 20000g 离心 2 分钟,然后至于磁力架上,待磁珠完全分 离后,用 10ul 枪头小心将上清液体转移至新的干净的离心管中;
4.      为了避免吸入磁珠,在离心管中还剩余少量液体时,将其于 20000g 离心 2 分钟,然后 至于磁力架上以吸出剩余的液体。



注意事项:

1.   在结合操作时请确保磁珠与样本充分混匀,建议使用混匀仪或涡旋振荡器。
2.   洗涤操作后如果管底残留有液体,请再次短暂离心后放于磁力架磁性分离,用小枪头吸 出洗涤液。
3.   每次操作请勿吸出磁珠,保证磁珠加入后一直在管中,只操作上清。