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转基因元件pUbi PCR试剂盒规格
  • 品牌:联祖
  • 产地:进口、国产
  • 货号:LZR86072
  • 价格: ¥电询
  • 发布日期: 2020-11-26
  • 更新日期: 2024-07-19
产品详请
产地 进口、国产
品牌 联祖
货号 LZR86072
用途 公司产品仅用于科研
纯度 %
规格 50次
是否进口

产品特点:

◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;

◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;

◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;

◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

参数规格:

产品名称:转基因元件pUbi PCR试剂盒规格

货号:LZR86072

产品规格:50次

产品运输:低温运输

产品保存:-20℃保存

产品有效期:一年

产品特点:

产品仅用于科研本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。

 

需要注意:

PCR反应液请在冰中配制,然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法(Cool Start Method)与热启动法(Hot Start Method)相结合,更能有效地减少PCR过程中的非特异性反应,增强PCR扩增的特异性,能得到良好的PCR结果。

PCR的反应条件:

因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。

◇ 循环次数

根据模板DNA的量以及扩增片段的大小,设定25~30个循环。

如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,则会出现Smear。

◇ Anneal以及Extension

合适的Anneal温度通常在45~68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外,由于在60~68℃间,也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时,每kbp大体可设定30秒~1分钟;当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常,Anneal温度太高,有时会得不到扩增产物;Anneal温度太低时,容易发生非特异性反应。另外,Extension时间太短时,会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成;而Extension时间太长时,会出现Smear。

 

使用方法

一、样品 DNA 的制备

1.用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个阳性对照和一个阴性对照。阳性对照是在 200μL 水中加 10μL PCR 阳性对照作为阳性对照,阴性对照是直接用 200μL 水作为阴性对照。提取结束后,*得到 200μL 模板 DNA(每个样品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否则PCR 抑制物很可能会抑制 PCR。二、PCR(60 μL 体系)

3.样品管:在 N+2 个PCR 管中加入下列成分:成分 N 个样品管 阴性对照 阳性对照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物对 各 2 μL 2 μL 2 μL 样品 DNA 模板 各 18 μL - - 阳性对照(纯化后) - 18 μL - 阴性对照(纯化后) - - 18 μL电泳检测

4.取 10-20 μL PCR 产物直接进行琼脂糖凝胶电泳(本产品不需要单独加loading buffer),使用 100 bp DNA Marker,如果样品为阳性,将会得到长度为 3582 bp 的扩增产物。

二反应的准备:   

待各组份融化后先瞬时离心,然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系,每次实验需加一个阴性和一个阳性对照,测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌,戴口罩,并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染,推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。   

三、PCR反应:   

降落PCR法(Touchdown PCR):94℃变性2分钟;首循环:94℃变性30秒,68℃退火30秒,72℃延伸45秒;八个循环开始,每循环退火温度下降1℃,其余不变;从第九个循环开始,反应条件固定为:94℃变性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸45秒,循环32次;循环结束后,在72℃延伸7分钟,*保持在4℃。

标准操作步骤:

产品仅用于科研如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1.液氮充分研磨样品。

2.收集研磨成粉末的50mg样品,置于1.5ml离心管中。

3.加入350μl65℃预热的缓冲液IL,并加入20μl蛋白酶K剧烈地漩涡振荡,确保所有的组织团都分散均匀。

4.65℃水浴20-30min。水浴期间颠倒样品数次。

5.加入350μl氯仿,充分混匀,12,000 rpm(~13,400×g)离心5分钟。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml离心管中。注意确保不要打散沉淀团或把组织碎片也一起转移。

7.加入4μl RNase A,涡旋混匀。室温放置2min。

8.加入二分之一上清体积的缓冲液IB与等体积的无水乙醇,充分混匀。如:向300μl上清中加入150μl缓冲液IB与300μl无水乙醇。

9.把上述混匀的液体转移到吸附柱上。10,000×g离心1 min以结合DNA,弃去滤出液体。纯化柱*容量为750μl,如果混合液大于750μl,请分两次过柱。

10.将吸附柱重新套回收集管中,加入500μl缓冲液WB至柱子中,10,000×g离心1min,倒弃流出液;

11.将吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g离心1min,倒弃流出液;

注意:DNA Wash Buffer使用前须按要求用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中,使用前须恢复到室温。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g离心1min,弃去流出液;

13.将吸附柱重新套回2ml收集管中,转速(>13000×g)离心空结合柱1min以干燥柱子的基质;这一步对下面的洗脱步骤至关重要。

14.将柱子置于1.5ml灭菌离心管,加入50-150μl65℃预热的洗脱缓冲液EB至柱子的膜中央。室温静置5min;

15. 室温下,离心(>13000)1min,以洗脱DNA。保留含DNA的流出液。将DNA储于-20℃。
司帕沙星英文名称:Sparfloxacin大鼠骨碱性磷酶(BALP)ELISA试剂盒规格:200mg保存:-20℃,避光

司坦唑英文名称:Stanozolol人协同刺激分子受体(CMR)ELISA试剂盒 规格:100mg保存:-20℃,避光

丝裂英文名称:Mitomycin大鼠横纹肌辅肌动蛋白α (sm Actinin-α )ELISA试剂盒规格:25mg保存:-20℃,避光

丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖英文名称:Gypsophila saponin 3-O- beta -D- glucuronic acid methyl小鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷磷(NADPH)ELISA试剂盒规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光

斯皮诺素英文名称:Spinosin人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA试剂盒规格:20mg保存:-20℃,避光

斯皮诺素;棘苷英文名称:Spinosin; spinosin小鼠Ⅰ型胶原(Col Ⅰ) ELISA试剂盒规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光

四环类杂质对照品英文名称:Tetracyclic impurity reference大鼠干细胞因子受体(SCFR)ELISA试剂盒规格:50mg保存:-20℃,避光

四环素英文名称:Tetracycline大鼠抗单核细胞抗体(AMA)ELISA试剂盒规格:200mg保存:-20℃,避光

四钠亮绿对照培养础英文名称:Four sulfonic acid sodium light green contrast medium base大鼠白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA试剂盒规格:4.5g/100ml保存:-20℃,避光

四英文名称:Tetrahydrofuran大鼠抗内皮细胞抗体(AECA)ELISA试剂盒规格:1ml保存:-20℃,避光

四姜黄素英文名称:Four hydrogen curcumin小鼠乙酰胆碱(ACH)ELISA试剂盒规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光

四小檗碱英文名称:Four berberine bisulfate人组胺(HIS)ELISA试剂盒规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光

松柏英文名称:Coniferyl alcohol鸭抗凝血素抗体(aPT1/aPT2)ELISA试剂盒规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光

松柏英文名称:Coniferyl aldehyde鸭环磷腺苷(cAMP)ELISA试剂盒规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光

松果菊苷英文名称:Echinacoside小鼠巨噬细胞来源的趋因子(MDC/CCL22)ELISA试剂盒规格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光

5-Hydroxy-2-nitrobenzaldehyde,98%大鼠β内啡肽(β-EP) 进口/国产

4-Bromobenzaldehyde diethyl acetal,99%人αL岩藻糖苷酶(AFU) 进口/国产

3-Bromobenzaldehyde Diethyl Acetal,98%小鼠αL岩藻糖苷酶(AFU) 进口/国产

2-Bromobenzaldehyde Diethyl Acetal,98%大鼠αL岩藻糖苷酶(AFU) 进口/国产

4-Quinolinecarboxaldehyde,97%犬5羟色胺(5-HT) 进口/国产

5-Methoxyindole-3-carboxaldehyde,≥99%人5羟色胺(5-HT) 进口/国产

3,4-Difluorobenzaldehyde,97%小鼠5羟色胺(5-HT) 进口/国产

2,4-Difluorobenzaldehyde,98%大鼠5羟色胺(5-HT) 进口/国产
转基因元件pUbi PCR试剂盒规格Penicillium│sp.提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 产生果胶酶培养基: 0015生长条件: 25-28℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

Tricholoma│acerbum (Bull.) Vent.分离基物: 菌体提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 14生长条件: 25存储条件: 定期移植法

Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk分离基物: 北京杨提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 14生长条件: 25存储条件: 定期移植法

Eupenicillium│sp.分离基物: 土壤提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: ;抗白色念珠菌培养基: CM0018生长条件: 26C存储条件: -80℃冰箱冻结;矿物油法;定期移植法

Cyathus│olla提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 14生长条件: 25℃存储条件: -80℃冰箱冻结法;定期移植法;其他

Escherichia│coli分离基物: 犊牛粪便提供形式: 冻干物安全等级: 2模式菌株: no应用领域: 科研及血清定型培养基: 335生长条件: 37存储条件: 真空冷冻干燥法;

Fomitopsis│pinicola (Sw.) P. Karst.分离基物: 菌盖或菌柄提供形式: 斜面培养物模式菌株: no培养基: 14生长条件: 26存储条件: 定期移植法

Aspergillus│toxicarius提供形式: 冻干物安全等级: 2模式菌株: no应用领域: 产生黄B1,B2,G1,G2.培养基: 0015生长条件: 25-28℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

Alteromonas│sp.分离基物: 水样/深海海水提供形式: 斜面培养物模式菌株: no应用领域: 产酶微生物/产蛋白酶、淀粉酶菌株培养基: 471生长条件: 25℃存储条件: 液氮超低温冻结法;-80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法