标准操作步骤：

产品仅用于科研如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1.液氮充分研磨样品。

2.收集研磨成粉末的50mg样品，置于1.5ml离心管中。

3.加入350μl65℃预热的缓冲液IL，并加入20μl蛋白酶K剧烈地漩涡振荡，确保所有的组织团都分散均匀。

4.65℃水浴20-30min。水浴期间颠倒样品数次。

5.加入350μl氯仿，充分混匀，12,000 rpm(~13,400×g)离心5分钟。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml离心管中。注意确保不要打散沉淀团或把组织碎片也一起转移。

7.加入4μl RNase A，涡旋混匀。室温放置2min。

8.加入二分之一上清体积的缓冲液IB与等体积的无水乙醇，充分混匀。如：向300μl上清中加入150μl缓冲液IB与300μl无水乙醇。

9.把上述混匀的液体转移到吸附柱上。10,000×g离心1 min以结合DNA，弃去滤出液体。纯化柱*容量为750μl,如果混合液大于750μl,请分两次过柱。

10.将吸附柱重新套回收集管中，加入500μl缓冲液WB至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；

11.将吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前须按要求用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中，使用前须恢复到室温。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g离心1min,弃去流出液；

13.将吸附柱重新套回2ml收集管中，转速（>13000×g）离心空结合柱1min以干燥柱子的基质；这一步对下面的洗脱步骤至关重要。

14.将柱子置于1.5ml灭菌离心管，加入50-150μl65℃预热的洗脱缓冲液EB至柱子的膜中央。室温静置5min；

15. 室温下，离心(>13000)1min，以洗脱DNA。保留含DNA的流出液。将DNA储于-20℃。

参数规格：

产品名称：转基因品系大豆G94-19探针法qPCR试剂盒规格

货号：LZR85452

产品规格：50次

产品运输：低温运输

产品保存：-20℃保存

产品有效期：一年

产品特点：

产品仅用于科研本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。

需要注意：

PCR反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）与热启动法（Hot Start Method）相结合，更能有效地减少PCR过程中的非特异性反应，增强PCR扩增的特异性，能得到良好的PCR结果。

PCR的反应条件：

因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。

◇ 循环次数

根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。

如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。

◇ Anneal以及Extension

合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。
使用方法

一、样品 DNA 的制备

1.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个阳性对照和一个阴性对照。阳性对照是在 200μL 水中加 10μL PCR 阳性对照作为阳性对照，阴性对照是直接用 200μL 水作为阴性对照。提取结束后，*得到 200μL 模板 DNA（每个样品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否则PCR 抑制物很可能会抑制 PCR。二、PCR（60 μL 体系）

3.样品管：在 N+2 个PCR 管中加入下列成分：成分 N 个样品管 阴性对照 阳性对照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物对 各 2 μL 2 μL 2 μL 样品 DNA 模板 各 18 μL - - 阳性对照（纯化后） - 18 μL - 阴性对照（纯化后） - - 18 μL电泳检测

4.取 10-20 μL PCR 产物直接进行琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果样品为阳性，将会得到长度为 3582 bp 的扩增产物。

二反应的准备： 　　

待各组份融化后先瞬时离心，然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系，每次实验需加一个阴性和一个阳性对照，测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌，戴口罩，并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染，推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。 　　

三、PCR反应： 　　

降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃变性2分钟;首循环：94℃变性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;八个循环开始，每循环退火温度下降1℃，其余不变;从第九个循环开始，反应条件固定为：94℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循环32次;循环结束后，在72℃延伸7分钟，*保持在4℃。

产品特点：

◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；

◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；

◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；

◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
大鼠激素释放激素（GnRH）elisa分析检测试剂盒PP5 Antibody100 ul

大鼠雌二醇（E2）抗体elisa分析检测试剂盒PP2A B Subunit (100C1) Rabbit mAb20 ul

大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶（M2-PK）elisa分析检测试剂盒PP2A B Subunit (100C1) Rabbit mAb100 ul

大鼠白三烯D4（LTD4）elisa分析检测试剂盒NUP98 (P671) Antibody100 ul

大鼠白介素21（IL-21）elisa分析检测试剂盒IQGAP1 Antibody100 ul

大鼠β-防御素（β-Defensins）elisa分析检测试剂盒DRAK2 (33D7) Rabbit mAb100 ul

大鼠β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）elisa分析检测试剂盒C/EBPα Antibody100 ul

大鼠toll样受体1（TLR1）elisa分析检测试剂盒4E-T Antibody100 ul

大鼠N端前脑钠素（NT-proBNP）elisa分析检测试剂盒Thioredoxin 1 Antibody (Mouse/Rat Preferred)100 ul

大鼠I型胶原（COL1）elisa分析检测试剂盒Aven Antibody100 ul

大鼠Ghrelin受体（Ghsr）elisa分析检测试剂盒Phospho-DARPP-32 (Thr75) Antibody100 ul

大鼠C型钠尿肽（CNP）elisa分析检测试剂盒DARPP-32 Antibody100 ul

大鼠ATP1B4蛋白（ATP1B4）elisa分析检测试剂盒Phospho-c-Jun (Thr91) Antibody100 ul

大鼠Ⅲ型前胶原C端肽（PⅢCP）elisa分析检测试剂盒BSA (D1C8Q) Rabbit mAb100 ul

猴绒毛膜激素（CG）elisa分析检测试剂盒JNK3 (55A8) Rabbit mAb100 ul

鱼过氧化氢酶（CAT）elisa分析检测试剂盒Sox2 (D9B8N) Rabbit mAb100 ul

人平滑肌细胞说明书DARPP-32 (19A3) Rabbit mAb100 ul
转基因品系大豆G94-19探针法qPCR试剂盒规格Candida│guilliermondii var. carpophila提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 酿造酱油。培养基: CM0077生长条件: 28-30℃存储条件: 真空冷冻干燥法

Nigrospora│oryzae分离基物: 生物样／海桑－果提供形式: 斜面培养物模式菌株: no应用领域: 近海丝状真菌培养基: 14生长条件: 25℃存储条件: 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法

太平洋海栖菌种属: Oceanicola│pacificus分离基物: 沉积物/深海沉积物提供形式: 冻干物模式菌株: yes应用领域: 模式菌株；潜在的有机污染物降解菌/分离自多环芳烃(PAHs)芘富集菌群培养基: 471生长条件: 25℃存储条件: 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 以淀粉为原料发酵制酒精。培养基: CM0077生长条件: 28-30℃存储条件: 真空冷冻干燥法；定期移植法

Streptomyces│xiamenensis分离基物: 沉积物/深海沉积物提供形式: 冻干物模式菌株: no应用领域: 生物活性微生物/潜在的培养基: 1003生长条件: 28℃存储条件: 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

Pseudomonas│putida提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 降解芳烃。培养基: CM0002生长条件: 30℃存储条件: 真空冷冻干燥法

弧菌种属: Vibrio│vulnificus分离基物: 生物样/人体血液提供形式: 冻干物安全等级: 2模式菌株: yes应用领域: 1、模式菌株 2、用于食品等方面的微生物检测，作为对照菌株。培养基: 471生长条件: 30℃存储条件: 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

Flavobacterium│anhuiense分离基物: 土壤提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 分类、研究，可以用来 生物肥料。培养基: 0065生长条件: 28℃存储条件: -80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法

Streptomyces│cacaoi var.asoensis提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 12生长条件: 28℃存储条件: 真空冷冻干燥法