PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

球孢白僵菌Sheep ACTg1 (Actin Gamma 1) ELISA Kit用途: 鞘翅目害虫生物防治

吕氏泰勒虫（宁县株）Sheep CT (Calcitonin) ELISA Kit拉丁属名: luwenshuni

枯草芽孢杆菌Sheep VDR (Vitamin D Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

苹果链格孢Sheep LAT (Linker For Activation of T-cell) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠杆菌Sheep PCDH1 (Protocadherin 1) ELISA Kit用途: 用于构建glnk基因突变株的互补菌株。

萎蔫短小杆菌Sheep NCAD (Neural Cadherin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

毛柄金钱菌(金针菇)Sheep TPO-Ab (Anti-Thyroid-Peroxidase Antibody) ELISA Kit用途: 食用

聚生壳菌Sheep F-TESTO (Free Testoterone) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

短密青霉Sheep PP13 (Placental Protein13) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium brevicompactum

拟热带假丝酵母Sheep PAEP (Progestagen-Associated Endometrial Protein) ELISA Kit拉丁属名: Candida  pseudotropicalis

围小丛壳菌Sheep ACHAP (Acetylcholinesterase Associated Protein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

尖孢枝孢Sheep COL6α3 (Collagen Type VI Alpha 3) ELISA Kit 用途: 药用植物内生菌

 涎沫假丝酵母Sheep MT (Melatonin) ELISA Kit拉丁属名: Candida zeylanoides

链单孢菌Sheep SDF-2 (Stromal Cell Derived Factor 2) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomonospora  sp.

类芽胞杆菌Sheep ECE1 (Endothelin Converting Enzyme 1) ELISA Kit 用途: 分类、研究，具有 固氮生物肥料潜力。
马泰勒梨形虫(原)探针法荧光定量PCR试剂盒 人胰蛋白酶(trypsin)ELISA试剂盒 英文名称：Human trypsin ELISA Kit 特价供应

HLA-G 人类白细胞抗原GMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-COX IV-1 细胞色素c氧化酶IV亚型1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NME6/IPIA ALPHA P53诱导细胞凋亡抑制蛋白α 规格 0.2ml

Human mammalian target of rapamyein,mTOR ELISA Kit 人雷帕霉素靶蛋白 96T

TXA2R 英文名称： 素A2受体 0.2ml

CSNK1A1L 英文名称： 酪蛋白激酶1/casein kinase Iα 0.2ml

CCDC8 英文名称： 卷曲螺旋结构域蛋白8 0.2ml

Anti-P2P-R/RBBP6 增殖潜能相关蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

GEF(Human Guanine Exchange Factor) ELISA Kit 人鸟苷酸交换因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-PMP22 外周髓鞘蛋白-22Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh HER2/NEU/ErbB2 HER2 规格 0.1ml

ACA-IgA(Mouse anti-cardiolipin antibody IgA) ELISA Kit 小鼠抗心磷脂IgA 96T

PLEKHG5 英文名称： 凋亡诱导受体PLEKHG5 0.2ml

大鼠孕酮受体(PGR)ELISA试剂盒 英文名称：Rat progesterone receptor,PGR ELISA Kit特价供应

大鼠孕酮受体(PROGR)ELISA试剂盒 英文名称：Rat Progesterone receptor,PROGR ELISA Kit特价供应

大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒英文名称：Rat apoprotein A1,apo-A1 ELISA Kit进口/分装

Histone H1b(Histone H1.4) 组蛋白H1b抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-5-HTR2A 5-羟色胺受体2AMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-c-Kit(Tyr721) 磷酸化原癌基因c-kit 规格 0.1ml

羊抗鸡IgG血清 0.5ml 国产

Connexin-32 英文名称： 间隙连接蛋白32 0.1ml

Anti-IL-17RB 白介素-17B受体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

IL-6(Human Interleukin 6) ELISA KIT 人白介素6Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Granzyme D/B/E/N/G/F/H 颗粒酶D/B/E/N/G/F/HMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Bov IgG/AP 碱性磷酸酶(AP)标记的小鼠抗IgG 规格 0.1ml

GBM(Human glomerular basement membrane antibogy) ELISA Kit 人抗肾小球基底膜 96T

RSPH4A 英文名称： Kartagener综合征相关蛋白RSHL3 0.2ml