PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

皱膜假丝酵母AXIN2 (Axis Inhibition Protein 2) ELISA Kit拉丁属名: Candida rugopelliculosa

泰安羧酸利用杆菌BSP (Bone Sialoprotein) ELISA Kit拉丁属名: Carboxylicivirga  taeanensis

长双歧杆菌PI (Proinsulin) ELISA Kit拉丁属名: Bifidobacterium  longum

玫瑰色热微菌COMP (Cartilage Oligomeric Matrix Protein) ELISA Kit拉丁属名: Thermomicrobium  roseum

球毛壳GUCA2B (Guanylate Cyclase Activator 2B) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

Roseivivax isoporaeMR (Mannose Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Roseivivax isoporae

蜡蚧菌PP (Placental Protein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

乳酸乳球菌乳亚种D-LDH (D-Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit 拉丁属名: Lactococcus  lactis subsp.lactis

贝伦格葡萄座腔菌IGFBP-7 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 7) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

三叶草根瘤菌NP (Nandrolone Phenylpropionate) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

坚强芽孢杆菌OLFM4 (Olfactomedin 4) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

破梭菌C* (Complement Component  *) ELISA Kit拉丁属名: tetani

纤细芽孢杆菌HB (Hemoglobin) ELISA Kit拉丁属名: Gracilibacillus

桃色欧文氏菌ERα (Estrogen Receptor Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Erwinia persicina

大肠埃希菌NLR (NOD-Like Receptor9) ELISA Kit拉丁属名: coli
唾液链球菌探针法荧光定量PCR试剂盒 人抑制素(INH)ELISA试剂盒英文名称：Human Inhibin，INH ELISA Kit 特价供应

CD34 CD34(多肽抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-CCP 瓜氨酸环肽Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PCDHAC1 原钙粘蛋白1 规格 0.2ml

HA Kit Influenza 甲型 H3N2 (A/Brisbane/10/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) ELISA配对 ELISA

TUSC5 英文名称： 基因5 0.2ml

MERTK 英文名称： c-mer原癌基因酪酸激酶 0.1ml

CCDC23 英文名称： 卷曲螺旋结构域蛋白23 0.2ml

Anti-KMT6/EZH2 蛋白EZH2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

ALOX-5(Human arachidonate 5-lipoxygenase) ELISA Kit 人花生四烯酸5脂加氧酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Nogo R 轴索过度生长抑制因子受体/Nogo受体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IL-1 Beta/IL-1B 白介素1β 规格 0.1ml

GP(Human anti-glycoprotein antibody) ELISA Kit 人抗糖蛋白 96T

PLAG1 英文名称： 多型性腺瘤基因1蛋白 0.2ml

Claudin 15 英文名称： 紧密连接蛋白15 0.1ml

Anti-Cyclin C 周期素CMulti-class antibodies规格： 0.1ml

MIP-4 人巨噬细胞炎性蛋白-4Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CRLR/CGRPR1 降钙素基因相关肽1型受体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh NLK/Nemo-like kinase Nemo样激酶 规格 0.1ml

Human Acylation Stimulating Protein,ASP ELISA Kit 人酰化刺激蛋白 96T

TNF alpha 英文名称： 坏死因子-α/TNFα 0.1ml

CNTN5 英文名称： 轴突蛋白5 0.2ml

Anti-phospho-PAK3(Ser139) 磷酸化p21激活激酶3Multi-class antibodies规格： 0.1ml

E2/UBCE(Human E2/ubiquitin-conjugating enzyme) ELISA Kit 人泛素结合酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-NR2B/NMDAR2B 谷氨酸受体2BMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IGFALS/ALS 样生长因子酸不稳定亚基ALS 规格 0.2ml

NP-Y(Mouse neuropeptide Y) ELISA Kit 小鼠神经肽Y 96T

phospho-PKA R2 (Ser96) 英文名称： 磷酸化蛋白激酶A受体2α亚基 0.1ml