PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

白布勒担孢酵母ACO1 (Aconitase 1) ELISA Kit拉丁属名: Bulleromyces albus

寡养单胞菌BALP (Bone Alkaline Phosphatase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

印度洋新鞘氨菌FLRT2 (Fibronectin Leucine Rich Transmembrane Protein 2) ELISA Kit 拉丁属名: Novosphingobium indicum

粉褶侧耳、粉红侧耳Anti-MPO (Anti-Myeloperoxidase Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Pleurotus rhodophyllus  Bres.

果生链核盘菌ApoF (Apolipoprotein F) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

壳菌TPO (Thyroid Peroxidase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

琉球曲霉FcγR II/CD32 (Receptor II for the Fc Fragment of IgG) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus luchuensis

酮丛毛单胞菌TAP (Trypsinogen Activation Peptide) ELISA Kit拉丁属名: Comamonas testosteroni

展示接霉sFMC (Soluble Fibrin Monomer Complex) ELISA Kit拉丁属名: Zygorhynchus exponens

解脂亚罗酵母SOCS3 (Suppressors of Cytokine Signaling 3) ELISA Kit 拉丁属名: Yarrowia  lipolytica

柿生假丝酵母EphA2 (Tyrosine protein kinase receptor A2) ELISA Kit拉丁属名: Candida diospyri

解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种F7 (Coagulation Factor Ⅶ) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  amyloliquefaciens subsp. amyloliquefaciens

木霉MX1 (Myxovirus Resistance 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

美澳型核果褐腐病菌ApoE (Apolipoprotein E) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酵母属ES-Ab (Anti-Endostatin Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  sp.
都柏林沙门氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书beta Glucan Receptor 英文名称： β葡聚糖受体 0.1ml

Anti-Slug 锌指转录因子SlugMulti-class antibodies规格： 0.2ml

ATR ELISA Kit 大鼠抗凝血酶受体Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-WNT9A 信号通路Wnt9aMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh GABA Transporter 1/GAT-1 γ氨基丁酸运载蛋白1 规格 0.1ml

G-CSF(Human Granulocyte Colony Stimulating Factor) ELISA Kit 人粒细胞集落刺激因子 96T

NAT8B 英文名称： N-乙酰转移酶8B 0.2ml

Casein kinase 1 gamma 2 英文名称： 酪蛋白激酶1γ2/casein kinase Iγ1 0.2ml

Anti-PACAP R1/VIP receptor-I 腺苷酸环化酶激活肽受体-IMulti-class antibodies规格： 0.2ml

NA(Human Noradrenaline) ELISA Kit 人去甲肾上腺素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Lpin1 protein Lpin1 Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh KLH 血蓝蛋白 规格 0.1ml

LH ELISA Kit 大鼠促黄体激素 96T

PGRPS 英文名称： 肽聚糖识别蛋白1 0.1ml

phospho-BCAR1(Tyr165) 英文名称： 磷酸化癌抗雌激素耐药蛋白1 0.1ml

Anti-S100A13 S100A13Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Human Leukemia inhibitory factor,LIF ELISA kit 人抑制因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-SCN1A SCN1AMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh GRAMD2 GRAM结构域蛋白2 规格 0.2ml

Cr ELISA Kit 大鼠骨胶原交联 96T

Osteocalcin 英文名称： 骨钙蛋白/骨钙素 0.1ml

CKMT 英文名称： 酸性线粒体肌酸激酶 0.1ml

Anti-LPL/PLASTIN2 脂蛋白脂酶Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Alpha-bungarotoxin, Alpha-BGT ELISA Kit α-银环蛇毒素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Phospho-p56Dok2(Tyr351)/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化D酪氨酸激酶衰减蛋白2IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CXorf56 X染色体开放阅读框56 规格 0.2ml

PRRSV M protein 猪蓝耳病病毒M蛋白 0.5mg

phospho-Kv4.2(Thr607) 英文名称： 磷酸化电压门控性钾通道蛋白Kv4.2 0.1ml