PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

地芽孢杆菌属UGCG (UDP-glucose ceramide glucosyltransferase) ELISA Kit拉丁属名: Geobacillus  sp.

棉毛状嗜热霉EFNA4 (Ephrin A4) ELISA Kit 拉丁属名: Thermomyces lanuginosus

栗色针孔菌fFDFT1 (Farnesyl Diphosphate Farnesyltransferase 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

毛柄金钱菌(金针菇)ERβ (Estrogen Receptor Beta) ELISA Kit用途: 食用、药用

不动杆菌SIAE (Sialic Acid Acetylesterase) ELISA Kit拉丁属名: Acinetobacter radioresistens

枯草芽孢杆菌CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  subtilis

白磷蘑菇MTF (Microtransferrin) ELISA Kit拉丁属名: Agaricus bernardii Quél.

枯草芽孢杆菌CLDN14 (Claudin 14) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

酿酒酵母BAFF/CD257/TNFSF13B (B-Cell Activating Factor) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

Microbacterium flavumSCT (Secretin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

哈茨木霉PEX2 (Peroxisomal Biogenesis Factor 2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

产紫青霉TNNI1 (Troponin I Type 1, Slow Skeletal) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium purpurogenum

肠膜明串珠菌IL-3 (Interleukin 3) ELISA Kit 拉丁属名: Leuconostoc  mesenteroides

歧异假丝酵母PYGL (Glycogen Phosphorylase, Liver) ELISA Kit 拉丁属名: Candida  diversa

焦土链霉菌PLA2G10 (Phospholipase A2, Group X) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces showdoensis
粘质沙雷菌探针法荧光定量PCR试剂盒规格小鼠孕激素/孕酮(PROG)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse Progesterone,PROG ELISA Kit进口/原装

小鼠孕酮受体(PROGR)ELISA试剂盒 英文名称：Rat Progesterone receptor,PROGR ELISA Kit特价促销

小鼠载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒英文名称：Mouse apoprotein,apo-A1 ELISA Kit进口/原装

小鼠载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒英文名称：Mouse apoprotein B100,apo-B100 ELISA Kit特价促销

小鼠载脂蛋白E(Apo-E)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse Apolipoprotein E,Apo-E ELISA Kit进口/原装

IL-8 白介素8(白细胞介素-8)(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-CD22/BLCAM B淋巴细胞粘附分子CD22Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Cathepsin Z 英文名称： 组织蛋白酶z 0.1ml

Anti-IFI16/p16 γ干扰素诱导蛋白16Multi-class antibodies规格： 0.1ml

NTX(Human cross linked N-telopeptide of type I collagen) ELISA Kit 人Ⅰ型胶原N末端肽Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-HSP90 Alpha 热休克蛋白90αMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MARCH8 膜相关环指蛋白8 规格 0.2ml

KLK 1(Human Kallikrein 1) ELISA Kit 人激肽释放酶1 96T

Phospho-Ret (Tyr905) 英文名称： 磷酸化指状蛋白RET 0.1ml

ADM R 英文名称： 肾上腺髓质素受体 0.1ml

Anti-CD26/ADCP2/DPP IV /FITC 荧光素标记CD26IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

PF3(Mouse platelet factor 3) ELISA Kit 小鼠血小板因子3Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-FLASH/CASP8AP2/FITC 荧光素标记半胱氨酸蛋白酶8相关蛋白2IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh ELMO1 吞噬细胞运动蛋白1 规格 0.2ml

OSM (Rabbit Oncostatin-M) ELISA Kit 兔抑瘤素M 96T

MMP-26 英文名称： 基质金属蛋白酶-26 0.2ml

CLK3 英文名称： 细胞分裂周期样激酶3 0.2ml

Anti-oxytocin receptor 催产素受体(缩宫素受体)Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Casp-3(Human Caspase 3) ELISA Kit 人胱天蛋白酶3Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-NRF-1 核呼吸因子-1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IGC 非洲爪蟾IGC 规格 1ml

VK1 ELISA Kit 大鼠维生素K1 96T

PARL 英文名称： 骨骼肌细胞线粒体膜蛋白PARL 0.2ml