PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

苜蓿中华根瘤菌CNTN4 (Contactin 4) ELISA Kit 用途: 与葫芦巴(Trigomella)共生固氮

毛云芝ACTH (Adrenocorticotropic Hormone) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

艾阿华诺卡氏菌PLA2G2A (Phospholipase A2, Group II A) ELISA Kit拉丁属名: Nocardia  iowensis

乳酒假丝酵母S100A12 (S100 Calcium Binding Protein A12) ELISA Kit拉丁属名: Candida  kefyr

蜜蜂生球拟酵母GRβ (Glucocorticoid Receptor Beta) ELISA Kit 拉丁属名: Torulopsis  apicola

漏斗棱孔菌Smad3/MADH3 (Mothers Against Decapentaplegic Homolog 3) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌NE/ELA2 (Elastase 2, Neutrophil) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis

食品检测用O157:H7大肠埃希氏菌8-epi-PGF2α (8-Epi-Prostaglandin F2 Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli O157:H7 for Food Analysis

泡盛曲霉CYPD (Cyclophilin D) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus awamori

盾壳霉FRA (Fibronection Related Antigen) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

刺糖多孢菌(可订)PLA2G2D (Phospholipase A2, Group II D) ELISA Kit拉丁属名: Saccharopolyspora spinosa

少孢哈萨克斯坦酵母SPB (Pulmonary Surfactant Associated Protein B) ELISA Kit 拉丁属名: Kazachstania exigua

洋葱伯克霍尔德氏菌TNFRSF1A (Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily, Member 1A) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑木耳DPYSL2 (Dihydropyrimidinase Like Protein 2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

橘黄裸伞sCKR (Soluble Cytokine Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Gymnopilus spectabilis
蒙得维的沙门氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒供应商Anti-CAS/CSE1 细胞凋亡敏感性基因Multi-class antibodies规格： 0.1ml

小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP ELISA Kit 进口/原装

小鼠雌二醇(E2)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Estradiol,E2 ELISA Kit进口/原装

小鼠雌二醇受体(ER)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Estradiol receptor,ER ELISA Kit特价促销

小鼠雌激素(E)ELISA试剂盒英文名称：Mouse estrogen,E ELISA Kit特价促销

小鼠雌三醇(E3)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Estriol,E3 ELISA Kit进口/原装

TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor) 促甲状腺素受体抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Caspase-1 P10 英文名称： 天冬酸-胱酸特异性蛋白酶家族 0.1ml

Anti-CCL15/MIP5 巨噬细胞炎性蛋白15Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Annexin V 膜粘连蛋白-5(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Cateninma gamma gamma连环蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh PCDHGA7 原钙粘蛋白γA7 规格 0.2ml

LAYN Kit Human 人 Layilin / LAYN ELISA配对 ELISA

phospho-Tau protein(Ser673) 英文名称： 磷酸化微管相关蛋白 0.1ml

AFP(A4) 英文名称： 甲胎蛋白单克隆(检测) 0.1ml

Anti-CD3/PE 荧光素PE标记CD3IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

GRH ELISA Kit 大鼠促生长激素释放激素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-AT1/FITC 荧光素标记紧张素IIgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FAK/PTK2 粘着斑激酶 规格 0.1ml

TPO-Ab(Mouse anti-Thyroid-Peroxidase antibody) ELISA Kit 小鼠抗甲状腺过氧化物酶 96T

Mesothelin 英文名称： 间皮素 0.1ml

Claudin 1 英文名称： 紧密连接蛋白1 0.2ml

Anti-Profilin 2 前纤维蛋白2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

ADV-IgG(Human Adenovirus IgG) ELISA Kit 人腺病毒IgGMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-kappa Opioid receptor kappa型受体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Langerin/CD207 白细胞分化抗原CD207 规格 0.2ml

PF/PFP(Rat Perforin/Pore-forming protein) ELISA Kit 大鼠穿孔素 96T

P2RX1 英文名称： 三磷酸腺苷受体受体P2X1 0.2ml