PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

RhodococcusCTSL (Cathepsin L) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

植物乳杆菌CRH (Corticotropin Releasing Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus plantarum

丛毛单胞菌（可定）DNM2 (Dynamin 2) ELISA Kit 拉丁属名: Comamonas sp.

金黄色葡萄球菌BAD (Bcl2 Associated Death Promoter) ELISA Kit 拉丁属名: Staphylococcus aureus

紫云英根瘤菌*GLUT3 (Glucose Transporter 3) ELISA Kit拉丁属名: Rhizobium astragali

藤黄微球菌MCP/CD46 (Membrane Cofactor Protein) ELISA Kit拉丁属名: Micrococcus luteus

巴斯德毕赤酵母HNRPA2B1 (Heterogeneous Nuclear Ribonucleoprotein A2/B1) ELISA Kit用途: 表达、分泌 磷脂酶

地衣芽孢杆菌Anti-CIIAb (Anti-Type II Collagen Antibody) ELISA Kit  拉丁属名: Bacillus  licheniformis

极单胞菌属CD30 (Cluster of Differentiation 30) ELISA Kit拉丁属名: Polaromonas glacialis

克鲁斯假丝酵母SPARC (Secreted Protein Acidic And Rich In Cysteine) ELISA Kit拉丁属名: Candida krusei

糙皮侧耳ATGA/TGAB (Anti-Thyroid-Globulin Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Pleurotus ostreatus

球毛壳菌（可订购）P-GP (Permeability Glycoprotein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

绿木霉NFRκB (Nuclear Factor Related To Kappa B Binding Protein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

副猪嗜血杆菌S100B (S100 Calcium Binding Protein B) ELISA Kit 拉丁属名: parasuis

假单胞菌ANG II R2-Ab (Angiotensin II Receptor 2 Antibody) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
禽沙门氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书Phospho-Aurora B (Thr232) + Aurora C (Thr198) 英文名称： 磷酸化有丝分裂激酶B/C 0.1ml

Anti- Gamma-Adaptin/FITC 荧光素标记衔接蛋白γIgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

cGMP(Mouse Cyclic guanosine monophosphate) ELISA Kit 小鼠环磷酸鸟苷Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CD86/B7-2 /FITC 荧光素标记CD86IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Donkey Anti-rabbit IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的驴抗兔IgG 规格 0.1ml

Ferritin 铁蛋白 96T

MYO6 英文名称： 肌球蛋白6 0.2ml

Caspase 2 英文名称： 半胱胺酸蛋白酶-2 0.1ml

Anti-Lamin B 核纤层蛋白BMulti-class antibodies规格： 0.2ml

GHRP(Human Growth Hormone Releasing Peptide) ELISA Kit 人生长激素释放多肽Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-LFABP/FABP-2 肝脏型脂肪酸结合蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh KLHL25 Kelch样蛋白25 规格 0.2ml

PF-3 ELISA Kit 大鼠血小板因子3 96T

PEA3 英文名称： 瘤促活化因子3 0.2ml

ASCL2 英文名称： ASCL2蛋白 0.2ml

Anti-CCL28/FITC 荧光素标记粘膜相关上皮趋化因子MECIgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

AGEs(Mouse advanced glycation end products) ELISA Kit 小鼠晚期糖基化终末产物Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CCL5/RANTES/FITC 荧光素标记调节活化的正常T细胞表达和分泌的因子IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh EGF 表皮生长因子(大鼠) 规格 0.1ml

c (Rabbit cardiac isoform of Tropnin T) ELISA Kit 兔心肌特异性肌钙蛋白T 96T

MNX1 英文名称： 运动神经元及胰腺同源蛋白1 0.2ml

CLASP2 英文名称： 细胞连接相关蛋白2 0.1ml

Anti-phospho-P53 (Ser6) 磷酸化抑制基因P53Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Alpha1 Beta-GP(Human Alpha1 Beta glycoprotein) ELISA Kit 人α1β糖蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-PCNA 增殖细胞核抗原Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HNF4/TCF4/HNF4A 肝细胞核因子4α 规格 0.1ml

VB6 ELISA Kit 大鼠维生素B6 96T

PAX4 英文名称： 配对盒同源基因4 0.1ml