PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

鹿皮色曲霉GIF (Gastric Intrinsic Factor) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus cervinus

胶孢pERK ( Phospho Extracellular Signal Regulated Kinase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

拟茎点霉NEB (Noradrenaline Bitartas) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

米根霉BMG/β2-MG (Beta-2-Microglobulin) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus oryzae

槐栓菌Bcl-3 (B-cell Leukemia/Lymphoma 3) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

松针散斑壳MUC6 (Mucin 6) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

菊池链格孢Neo-T4 (Neonatal Thyroxine) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑木耳IFABP/FABP2 (Intestinal Fatty Acid Binding Protein) ELISA Kit用途: 产物

卷曲链霉菌IL-1ra (Interleukin 1 Receptor Antagonist) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces cirratus

厚环粘盖牛肝菌PARC/CCL18 (Pulmonary Activation Regulated Chemokine) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

高地芽孢杆菌ENA-78 (Epithelial Neutrophil Activating Peptide 78) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus altitudinis

土曲霉TSP1 (Thrombin Sensitive Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  terreus

立枯丝核菌L-LDH (L-Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

日本山茶刺盘孢5-HIAA (5-Hydroxyindolacetic Acid) ELISA Kit拉丁属名: Colletotrichum camelliae-japonicae

白酒 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP、邻苯二 甲酸二丁酯 DBP、邻苯二甲酸二（4- 甲基-2-戊基）酯 BMPP、邻苯二甲酸 二（2-乙氧基）乙酯 DEEP、邻苯二 甲酸二戊酯 DPP、邻苯二甲酸二己酯 DHXP、邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP、 邻苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯 DBEP、邻苯二甲酸二环己酯 DCHP、 邻苯二甲酸二（α-乙基）己酯 DEHP、 邻苯二甲酸二苯酯、邻苯二甲酸二正 辛酯 DNOP、邻苯二甲酸二甲酯 DMP、邻苯二甲酸二乙脂（DEP）PRELP (Proline Arginine Rich End Leucine Rich Repeat Protein) ELISA Kit拉丁属名: 白酒 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP、邻苯二 甲酸二丁酯 DBP、邻苯二甲酸二（4- 甲基-2-戊基）酯 BMPP、邻苯二甲酸 二（2-乙氧基）乙酯 DEEP、邻苯二 甲酸二戊酯 DPP、邻苯二甲酸二己酯 DHXP、邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP、 邻苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯 DBEP、邻苯二甲酸二环己酯 DCHP、 邻苯二甲酸二（α-乙基）己酯 DEHP、 邻苯二甲酸二苯酯、邻苯二甲酸二正 辛酯 DNOP、邻苯二甲酸二甲酯 DMP、邻苯二甲酸二乙脂（DEP）
牛瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 ARVCF 英文名称： 与犰狳重复基因 0.2ml

Anti-WNK1 赖氨酸缺陷型蛋白激酶1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

TBA ELISA Kit 大鼠总胆汁酸Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-TBX3 转录因子Tbx3Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Goat Anti-Bovine IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的羊抗IgG 规格 0.1ml

MSH(Human melanocyte stimulating hormone) ELISA Kit 人黑色素细胞刺激素 96T

N-cadherin 英文名称： N-钙粘附分子 0.1ml

CARKD 英文名称： 碳水化合物激酶结构域蛋白质 0.2ml

Anti-KCNA5 钾电压阀门通道混合器相关亚家族成员5Multi-class antibodies规格： 0.2ml

SAA3(Human serum amyloid A3) ELISA Kit 人血清淀粉样蛋白A3Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-MK2/MAPKK2 原活化蛋白激酶激酶2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh KCNC3/Kv3.3 离子通道蛋白Kv3.3 规格 0.2ml

CORT ELISA Kit 大鼠皮质酮/肾上腺酮 96T

PHEX 英文名称： 维生素D低磷性蛋白 0.2ml

Anti-VDAC/FITC 荧光素标记电压依赖性阴离子通道IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-GSK-3 Beta(Ser21+Ser29) 磷酸化葡萄糖合成激酶3β 规格 0.1ml

CD46/MCP(membrane cofactor protein)rat, mouse 膜辅蛋白/内源性辅助因子活性蛋白抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人旋毛虫(Trichinella Ab)ELISA试剂盒英文名称：Human Trichinella antibody ELISA Kit特价供应

人活性肠肽(VIP)ELISA试剂盒英文名称：Human Motilin,MTL ELISA Kit进口/原装

人活性肽酶抑制剂(VPI)ELISA试剂盒 英文名称：Human vasopeptidase inhibitors,VPI ELISA Kit特价供应

人紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA试剂盒英文名称：Human angiotension Ⅰ，Ang-Ⅰ ELISA Kit进口/原装

CKLFH3 英文名称： 趋化素样因子超家族成员3 0.2ml

Anti-phospho-p53BP1(Ser25/29) 磷酸化p53结合蛋白1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

LPA(Human L-phenylalanine) ELISA Kit 人苯丙氨酸Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Fascin1 纤维束1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Histone H3 (Di Methyl K9) 二甲基化组蛋白H3K9 规格 0.1ml

BA(Human Blocking antibody) ELISA Kit 人封闭 96T

PMVK 英文名称： 磷酸甲羟戊酸激酶 0.1ml