PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

米曲霉F9 (Coagulation Factor Ⅸ) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  oryzae

壳梭孢属（都不提供）PAEP (Progestagen-Associated Endometrial Protein) ELISA Kit拉丁属名: Fusicoccum sp.

枯草芽孢杆菌SCG2 (Secretogranin II) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

铅黄肠球菌PCP (Procollagen C Peptidase)ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

粉紫小菇BPI (Bactericidal/Permeability Increasing Protein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

假丝酵母属RARα (Retinoic Acid Receptor Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Candida  sp.

青霉C3b (Complement Fragment 3b) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

香菇*iPLA2 (Phospholipidase A2, Calcium Independent) ELISA Kit拉丁属名: Lentinus edodes (Berkeley) Singer

雷夫松氏菌NMP-22 (Nuclear Matrix Protein 22) ELISA Kit拉丁属名: Leifsonia sp.

苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种CTGF (Connective Tissue Growth Factor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母THRSP (Thyroid Hormone Responsive) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

枯草芽孢杆菌FABP3 (Fatty Acid Binding Protein 3, Muscle and Heart) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

远青链霉菌CNP (C-type Natriuretic Peptide) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces azureus

卷枝毛霉卷枝变型HSPβ6/HSP-20 (Heat Shock Protein Beta 6) ELISA Kit拉丁属名: Mucor circinelloides f. circinelloides

日本根霉TCF20 (Transcription Factor 20) ELISA Kit 拉丁属名: Rhizopus  japonicus
莫氏立克次体探针法荧光定量PCR试剂盒说明书FECH 英文名称： 铁螯合酶 0.1ml

钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶IG Anti-Camk1g 0.1ml

Anti-TWIST protein/FITC 荧光素标记TWIST转录因子蛋白IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-HSL (Ser959+960) 磷酸化荷尔蒙敏感脂肪酶 规格 0.1ml

CBX3/HP1 gamma homolog(Chromobox homolog 3) 染色盒同源物3抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

大鼠红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒 英文名称：Rat Erythropoietin,EPO ELISA Kit进口/原装

大鼠红细胞生成素受体(EPOR)ELISA试剂盒英文名称：Rat Erythropoietin receptor,EPOR ELISA Kit特价促销

CARD4 英文名称： 凋亡加强结构域蛋白4 0.2ml

Anti-phospho-Ephrin B (Tyr317) 磷酸化Ephrin BMulti-class antibodies规格： 0.1ml

KGF 大鼠角蛋白生长因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-ENPP3/CD203c ENPP3IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MURF2 肌肉特异性环指蛋白2 规格 0.2ml

f-Hb(Human free haemoglobin) ELISA Kit 人游离血红蛋白 96T

SLCO3A1 英文名称： 可溶性载质转运蛋白3A1 0.2ml

Anti-BCHE 丁酰胆碱酯酶单克隆Multi-class antibodies规格： 0.2ml

EDG1 英文名称： 内皮细胞分化鞘脂G蛋白偶联受体1 0.1ml

CREB结合蛋白 Anti-CBP 0.1ml

Anti-ULBP1/N2DL1/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠UL16结合蛋白1蛋白IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Histone H3 (Ser28) 磷酸化组蛋白H3 规格 0.1ml

VEGF(Vascular endothelial growth factor) 内皮生长因子(多肽抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人前列环素(PGI)ELISA试剂盒 英文名称：Human prostacycline,PGI ELISA Kit特价供应

CKAP4 英文名称： 细胞骨架相关蛋白4 0.2ml

Anti-LRIG1 LRIG1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

PIPLC(Human phosphoinositide-specific phospholipase C) ELISA Kit 人磷酯酰肌醇特异性磷酯酶CMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-Phospho-NEDD4L (Ser342) 磷酸化泛素连接酶NEDD4-2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh IL5RA/CD125 白介素-5受体α链IL-5Rα 规格 0.1ml

PI Ab-IgG/IgM(human phosphatidylinositol antibody IgG/IgM) ELISA Kit 人磷脂酰肌醇IgG/IgM 96T

Prostaglandin dehydrogenase 1 英文名称： 素脱氢酶1 0.1ml