PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

稻梨孢MSTN (Myostatin) ELISA Kit拉丁属名: Pyricularia  oryzae

玫烟色棒束孢DBP (Vitamin D Binding Protein) ELISA Kit 拉丁属名: Isaria fumosorosea

香菇属CGRP (Calcitonin Gene Related Peptide) ELISA Kit拉丁属名: Lentinula  sp.

海绵假单胞菌TG (Thyroglobulin) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas pachastrellae

水稻肠杆菌TLN (Talin) ELISA Kit拉丁属名: Enterobacter oryzae

阿利坎特港富盐菌ANG I (Angiotensin I) ELISA Kit拉丁属名: Haloferax lucentensis

米曲霉LN (Laminin) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  oryzae

ThermobifidaSEMA4C (Semaphorin 4C) ELISA Kit拉丁属名: Thermobifida  halotolerans

耐赖氨酸芽孢杆菌LRP (Lung Resistance-Related Protein) ELISA Kit拉丁属名: Lysinibacillus boronitolerans

酿酒酵母PDGFRα (Platelet Derived Growth Factor Receptor Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

光滑青霉TDT (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium glabrum

嗜热链球菌PKBG (Protein Kinase B Gamma) ELISA Kit 拉丁属名: Streptococcus  thermophilus

pBV220CA5B (Carbonic Anhydrase VB, Mitochondrial) ELISA Kit规格: 1ml甘油管1支，20ul质粒，一般次日下午

黄柄曲霉FcaR (Fc Fragment of IgA Receptor) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus flavipes

红细菌COL14 (Collagen Type XIV) ELISA Kit拉丁属名: Rhodobacter sp.
鼻疽假单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书Anti-ATXN1 失调症蛋白1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-alpha Adducin(Ser726) 磷酸化内收蛋白a1 规格 0.1ml

Neurofilament 神经丝蛋白 浓缩液 0.1ml 进口分装

URP2 英文名称： 整合素结合性信号分子 0.1ml

DAP5 英文名称： 死亡相关蛋白5 0.1ml

Anti-ATXN1 失调症蛋白1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Etv5 英文名称： 转录因子Ets差异基因5 0.2ml

CAMKK2 英文名称： 钙调蛋白激酶激酶β 0.1ml

Anti-EDG2/LPA1 溶血磷脂酸受体蛋白1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

MYD88(Human myeloid differentiation primary response gene 88) ELISA Kit 人髓样分化因子初次应答基因88Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-PAX2 配对盒基因2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh HORMAD2 异质核糖核蛋白U2样蛋白 规格 0.2ml

S-100 ELISA Kit 大鼠S100蛋白 96T

PTP1B 英文名称： 蛋白酪酸磷酸酶-1B 0.1ml

beta-Amyloid 1-42(CT) 英文名称： β淀粉样肽/Aβ42 0.1ml

Anti-CD137/TNFRSF9/FITC 荧光素标记CD137IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

IGF-1 ELISA Kit 大鼠样生长因子1Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-BAFFR/Tnfrsf13c/CD268/FITC 荧光素标记B细胞活化因子受体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh ET-1(2C4) 内皮素-1单克隆 规格 0.2ml

sCKR(Human soluble cytokine receptor) ELISA Kit 人可溶性细胞因子受体 96T

MSK1 英文名称： 有丝分裂原和应激活化型蛋白激酶1 0.2ml

CIRBP 英文名称： 冷诱导RNA结合蛋白 0.2ml

Anti-phospho-P53 (Thr18) 磷酸化抑制基因P53Multi-class antibodies规格： 0.1ml

MLKL(Human mixed lineage kinase domain-like) ELISA Kit 人混合系列蛋白激酶样结构域Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Paxillin 桩蛋白PaxillinMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh hnRNP R 异质性核糖核蛋白R 规格 0.2ml

AMA IgA(Human anti-myelin antibody IgA) ELISA Kit 人抗髓磷脂IgA 96T

PCDHB6 英文名称： 原钙粘附蛋白β6 0.1ml