PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

贵州绿僵菌MGST1 (Microsomal Glutathione S Transferase 1) ELISA Kit 用途: 生物防治

粘盖牛肝菌*MMP-7 (Matrix Metalloproteinase 7) ELISA Kit 拉丁属名: Suillus bovinus

鸡伤寒沙门氏菌PROS (Protein S) ELISA Kit拉丁属名: gallinarum

大肠埃希氏菌ANP (Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

柿盘多毛孢PUMA (P53 Upregulated Modulator of Apoptosis) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

AlbidiferaxTP53 (Tumor Protein p53) ELISA Kit拉丁属名: Albidiferax sp.

南方盐单胞菌RANTES (Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed And Secreted) ELISA Kit 拉丁属名: Halomonas meridiana

维罗纳假单胞菌RAG-2 (Recombination Activating Gene 2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠埃希氏菌CgB (Chromogranin B) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

松口蘑FTL (Ferritin, Light Polypeptide) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌MMP-2 (Matrix Metalloproteinase 2) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis

POMC (Pro-Opiomelanocortin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

紫红曲霉ADH (Antidiuretic Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Monascus purpureus

植物乳杆菌植物亚种INSR (Insulin Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  plantarum subsp. plantarum

高温放线菌科未定属GSTpi (Glutathione S Transferases Pi) ELISA Kit拉丁属名: Thermoactinomycetaceae  sp.
青霉通用探针法荧光定量PCR试剂盒供应商MMP-1(Mous ematrix metalloproteinases-1) 基质金属蛋白酶-1(小鼠抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-CD33/Siglec-3 CD33Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PADI4 相关基因 规格 0.2ml

CLEC6A Kit Mouse 小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 ELISA配对 ELISA

TPP1 英文名称： 细胞生长抑制基因1蛋白 0.2ml

CD1A 英文名称： T淋巴细胞CD1 0.1ml

Anti-CD33/Siglec-3 CD33Multi-class antibodies规格： 0.2ml

CAB39L 英文名称： 钙结合蛋白样39 0.2ml

Anti-LH 促黄体生成素单克隆Multi-class antibodies规格： 0.1ml

sPLA2(Human secreted phospholipase A2) ELISA Kit 人分泌型磷脂酶A2Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-NR2C/NMDAR2C 谷氨酸受体2C(N端)Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IGFBP4/IBP4 样生长因子结合蛋白4 规格 0.1ml

GHRP(Mouse Growth Hormone Releasing Peptide) ELISA Kit 小鼠生长激素释放多肽 96T

phospho-PTPRA(Tyr798) 英文名称： 磷酸化酪酸磷酸酶α 0.1ml

Anti-phospho-ADRB2(Ser346) 磷酸化肾上腺素能受体β2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-CBL2(Tyr774) 磷酸化原癌蛋白CBL2 规格 0.1ml

单组分AEC染色试剂盒 200片/20ml 需用甘油封固,红色

VAPB 英文名称： 囊泡相关膜蛋白相关的蛋白B 0.2ml

DNA polymerase mu 英文名称： DNA聚合酶μ/DNA pol μ 0.2ml

Anti-phospho-ADRB2(Ser346) 磷酸化肾上腺素能受体β2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

ETV3L 英文名称： ETV3L蛋白 0.2ml

Chemokine Receptor D6 英文名称： 趋化因子受体D6 0.1ml

Anti-HBeAg(1) 人e抗原(1)Multi-class antibodies规格： 0.1ml

TRAIL-R1(Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 1) ELISA Kit 人坏死因子相关凋亡诱导配体1Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-TNFRSF18 糖皮质激素诱导坏死因子受体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Goat IgG/PE PE标记的小鼠抗羊IgG 规格 0.1ml

MLC(Human Myosin light Chain) ELISA Kit 人肌球蛋白轻链 96T

RAD50 英文名称： DNA修复蛋白Rad50 0.2ml