PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

酿酒酵母SYK (Spleen Tyrosine Kinase) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

巨大芽孢杆菌 ATP (Thymidine Phosphorylase) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus megaterium A de Bary

嗜松青霉GATA3 (GATA Binding Protein 3) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium pinophilum

腐皮镰孢GPLD1 (Glycosylphosphatidylinositol Specific Phospholipase D1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

韩国海杆状菌COL9α3 (Collagen Type IX Alpha 3) ELISA Kit拉丁属名: Marinobacter koreensis

山原申氏菌LCN2 (Lipocalin 2) ELISA Kit拉丁属名: Shinella yambaruensis

泡囊短波单胞菌LTβR (Lymphotoxin Beta Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Brevundimonas vesicularis

黄色刺孢链霉菌CA125 (Carbohydrate Antigen 125) ELISA Kit  拉丁属名: Streptomyces flavospinosporus

孟氏假单胞菌CKMT1B (Creatine Kinase, Mitochondrial 1B ) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas  mandelii

Cecembia sp.PDGFC (Platelet Derived Growth Factor C) ELISA Kit 拉丁属名: Cecembia sp.

大肠埃希氏菌SDH (Sorbitol Dehydrogenase) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia  coli

球孢白僵菌PLCγ2 (Phospholipase C Gamma 2, Phosphatidylinositol Specific) ELISA Kit用途: 昆虫防治研究

环圈链霉菌MCP-4/CCL13 (Monocyte Chemotactic Protein 4) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces anulatus

球孢白僵菌ERK (Extracellular Signal Regulated Kinase) ELISA Kit用途: 生物防治

斑形叶点霉FⅫa (Activated Coagulation Factor Ⅻ) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
变形杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明书phospho-AMPK alpha 2 (Ser491) 英文名称： 磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α2 0.1ml

Anti-ARIP2B/FITC 荧光素标记激活素受体2B/激活素受体相互作用蛋白2bIgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

MYS(Mouse Myosin) ELISA Kit 小鼠肌球蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-cdc25A /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠细胞分裂周期蛋白25IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Donkey Anti-Guinea pig IgG/HRP 辣根过氧化物酶标记的驴抗豚鼠IgG 规格 0.1ml

FSH ELISA Kit 鱼促卵泡素 96T

MrpL12 英文名称： 线粒体核糖体蛋白L12 0.1ml

Calpain 12 英文名称： 钙激活蛋白酶12 0.2ml

Anti-Ntn1 轴突导向因子1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

M2-PK (Human Pyruvate Kinase) ELISA Kit 人丙酮酸激酶M2型同工酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Phospho-NuMA (Ser395) 磷酸化核有丝分裂器NuMA蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh IFN gamma(F2E4) γ-干扰素单克隆 规格 0.1ml

CRP ELISA Kit 大鼠C反应蛋白 96T

PCDHAC1 英文名称： 原钙粘蛋白1 0.2ml

大鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒英文名称：Rat Interleukin 1 receptor antagonist, IL-1ra ELISA Kit进口/原装

GRB2/ASH peptide 生长因子受体结合蛋白2抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Oct4 Oct4 鼠单抗 (FITC) Human

Rhesus antibody Rh phospho-CstF64(Ser498) 磷酸化细胞分裂相关蛋白CSTF64 规格 0.1ml

染色液 100ml 自产

ZNF704 英文名称： 锌指蛋白704 0.2ml

DCUN1D2 英文名称： DCN1样蛋白2 0.2ml

CHURC1 英文名称： 神经诱导胚胎发育相关蛋白Churchill 0.2ml

Anti-GABABR1 gamma氨基丁酸B型受体1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

HGF 小鼠肝细胞生长因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-FGF8/HBGF-8 成纤维细胞生长因子8Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy3 PE-Cy3标记的小鼠抗兔IgM 规格 0.1ml

ST(Human Serotonin) ELISA Kit 人血清素/血清胺 96T

SPATA3 英文名称： 生成相关蛋白3 0.2ml