PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

单核增生李斯特氏菌bFGF/FGF2 (Basic Fibroblast Growth Factor) 拉丁属名: Listeria monocytogenes

库德里阿兹威毕赤酵母CRP (C-reactive protein) ELISA Kit拉丁属名: Pichia kudriavzevii

葡萄座腔菌E2 (Estradiol) ELISA Kit拉丁属名: Botryosphaeria dothidea

轮枝孢EGF (Epidermal growth factor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌CCL1 (Chemokine C-C-Motif Ligand 1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

大肠埃希菌MCSP (Melanoma Associated Chondroitin Sulfate Proteoglycan) ELISA Kit拉丁属名: coli

花生科萨克氏菌PLSCR2 (Phospholipid Scramblase 2) ELISA Kit 拉丁属名: Kosakonia arachidis

动胞囊菌MT (Melatonin) ELISA Kit拉丁属名: Kineosporia sp.

白布勒担孢酵母FLNβ (Filamin B, Beta) ELISA Kit拉丁属名: Bulleromyces albus

嗜松青霉IL-4 (Interleukin 4) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium pinophilum

白灰树花MYL9 (Myosin Light Chain 9, Regulatory) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母C/EBPε (CCAAT/Enhancer Binding Protein, Epsilon) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

小孢矛束霉GUSβ (β-glucuronidase) ELISA Kit拉丁属名: Cephalotrichum microsporum

淡紫拟青霉HRG (Histidine Rich Glycoprotein) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

谷氨酸棒杆菌GPC2 (Glypican 2) ELISA Kit 拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum
丙酸杆菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明书CYP4A22 英文名称： 细胞色素P4504A22(脂肪酸Ω羟化酶) 0.2ml

Anti-Gentamicin Monoclonal Antibody 庆大霉素单克隆Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Metronidazole/BSA 甲硝唑偶联血清白蛋白Multi-class antibodies规格： 10mg

Anti-CEBP Beta 转录调节因子C/EBP βMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh OCLN/Occludin 紧密连接蛋白 规格 0.1ml

SDS-PAGE Protein Loading Buffer-non reduced form SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液-非还原型 0.5ml

tinagl1 英文名称： tinagl1 0.2ml

CALHM1 英文名称： 钙平衡调节蛋白1 0.2ml

Anti-Phospho-LATS1 (Ser909) 磷酸化抑制基因LATS1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Beta Manase(Human Alpha mannosidase) ELISA Kit 人β甘露糖苷酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-NK-2R 神经激肽A受体/K物质受体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh IL-13Ra2 白细胞介素-13受体a2 规格 0.1ml

PCNA(Human proliferating cell nuclear antigen antibody) ELISA Kit 人抗增殖细胞核抗原 96T

phospho-PARK2(Ser378) 英文名称： 磷酸化帕金蛋白 0.1ml

大鼠环孢素A(CsA)ELISA试剂盒英文名称：Rat Cyclosporine A,CsA ELISA Kit特价供应

大鼠环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒英文名称：Rat Cyclic guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit进口/原装

大鼠环磷酸腺苷(cAMP)ELISA试剂盒英文名称：Rat cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA Kit特价供应

GABAB1(GABAb Receptor 1) g-氨基丁酸B1受体(多肽)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

CEACAM1 CEACAM1 / CD66a 鼠单抗 (PE) Human

Rhesus antibody Rh Phospho-delta Opioid Receptor (Ser363) 磷酸化D型受体 规格 0.1ml

PVDF膜(15×60cm 0.45um) 1张 Pall-Gelman

CHRND 英文名称： 型乙酰胆碱受体δ/AChRδ 0.2ml

Anti-ENPP3/CD203c ENPP3IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

TGF Beta 1 大鼠转化生长因子 β 1Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-DTNB 肌Dystrobrevin β蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Natriuretic Peptide Receptor A 利钠肽受体A 规格 0.2ml

Human Complement fragment 4a,C4a ELISA Kit 人过敏毒素/补体片断4 96T

SLCO2B1 英文名称： 可溶性载质转运蛋白2B1 0.2ml