PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

PorifericolaPTN (Pleiotrophin) ELISA Kit拉丁属名: Porifericola sp.

黑曲霉EloA (Elongin A) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

美澳型核果褐腐病菌TGM2 (Transglutaminase 2, Tissue) ELISA Kit拉丁属名: Monilinia fructicola

黄单胞菌SPJ (Surfactant Associated Protein J) ELISA Kit用途: 在无机盐培养基中以为碳源培养，6天内可在固体培养基上形成透明的水解圈。

蜡状芽孢杆菌Smad4/MADH4 (Mothers Against Decapentaplegic Homolog 4 )ELISA Kit拉丁属名: Bacillus cereus

大肠埃希菌EGFR2 (Epidermal Growth Factor Receptor 2) ELISA Kit拉丁属名: coli

糙皮侧耳TNNI2 (Troponin I Type 2, Fast Skeletal) ELISA Kit拉丁属名: Pleurotus ostreatus

黑曲霉PPIL1 (Peptidylprolyl Isomerase/Cyclophilin Like 1) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus niger

松球壳孢菌BMP-4 (Bone Morphogenetic Protein 4) ELISA Kit拉丁属名: Sphaeropsis sapinea

黑根霉菌LT-E4 (Leukotriene E4) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

盘长孢状刺盘孢ES-Ab (Anti-Endostatin Antibody) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

香蕉生假丝酵母BCDF (B-Cell Differentiation Factor)  ELISA Kit拉丁属名: Candida musiphila

果生链核盘菌SST (Somatostatin) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

长谷川赤担孢酵母TNFRSF1B (Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily, Member 1B) ELISA Kit拉丁属名: Erythrobasidium hasegawianum

地锤菌属PLA2G12B (Phospholipase A2, Group XII B) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
人分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒规格MARCH5  膜相关环指蛋白5抗体甲芬那酸2-((2,3-Dimethylphenyl)amino)benzoic acid化学标准品 分 子 式: C15H15NO2 分 子 量: 241.2851

MARCH6  膜相关环指蛋白6抗体异木香酸Isocostic acid对照药材 分 子 式:  分 子 量:

MARCH7/Axotrophin  膜相关环指蛋白7抗体3-羟基巴戟醌化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

MARCH8  膜相关环指蛋白8抗体去甲乌药碱盐酸盐6,7-Dihydroxy-1-(4-Hydroxybenzyl)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline Hydrochloride中药标准品  分 子 式: C16H17NO3.HCl 分 子 量: 307.77202

MARCH9  膜相关环指蛋白9抗体毛喉帖 GForskolin G对照药材 分 子 式:  分 子 量:

MARCH10  膜相关环指蛋白10抗体MES buffer(0.1mol/L,pH4.7)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

MARCH11  膜相关环指蛋白11抗体去氧土大黄苷；甲基虎杖苷trans-Desoxyrhaponticin化学标准品 分 子 式: C21H24O8 分 子 量: 404.41046