PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

秦氏蜜环菌GH2 (Growth Hormone 2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

草生毛霉GLα (Galactosidase Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Mucor foenicola

芽孢杆菌属ACA-IgG (Anti-Cardiolipin Antibody IgG) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  sp.

龙舌兰刺盘孢VacA (Vacuolating Cytotoxin A) ELISA Kit用途: 病原菌

链孢囊菌TFPI (Tissue Factor Pathway Inhibitor) ELISA Kit用途: 代谢产物具有抗菌活性。

黑曲霉CD42 (Cluster of Differentiation 42) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  niger

玫瑰暗黄链霉菌MMP-24 (Matrix Metalloproteinase 24) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces roseofulvus

地中海中慢生根瘤菌*CA5B (Carbonic Anhydrase VB, Mitochondrial) ELISA Kit拉丁属名: Mesorhizobium metallidurans

扣囊复膜孢酵母SELP (P-Selectin) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomycopsis fibuligera

鼠李糖乳杆菌TPO (Thrombopoietin) ELISA Kit 拉丁属名: Lactobacillus  rhamnosus

红城红球菌TH (Tyrosine Hydroxylase) ELISA Kit用途: Produces citric acid (U.S. Pat. 3.691.012), L-glutamic acid from hydrocarbons (U.S. Pat. 3,764,473)

根瘤菌PCSK9 (Proprotein Convertase 9) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

热带假丝酵母SYNPO (Synaptopodin) ELISA Kit 拉丁属名: Candida tropicalis

大肠埃希氏菌定量质控菌株*REG1α (Regenerating Islet Derived Protein 1 Alpha) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

群结腐霉CCL3L1 (Chemokine C-C-Motif Ligand 3 Like Protein 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
东方蜜蜂微孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒 APR3/C2orf28  凋亡相关蛋白3抗体

ECRG4/C2orf40  相关基因4蛋白抗体

C2ORF25  2号染色体开放阅读框25抗体

C2orf60  2号染色体开放阅读框抗体

C2orf68  2号染色体开放阅读框68抗体

C2ORF47  2号染色体开放阅读框47抗体

TCF9/GCF  转录因子9抗体