PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

热带假丝酵母Fcγ (Fc Fragment of IgG) ELISA Kit 拉丁属名: Candida  tropicalis

鸭疫里氏杆菌AVPR1A (Arginine Vasopressin Receptor 1A) ELISA Kit拉丁属名: anatipestifer

松针散斑壳ADCY4 (Adenylate Cyclase 4) ELISA Kit拉丁属名: Lophodermium pinastri

根瘤菌PHB (Prohibitin) ELISA Kit 用途: 固氮

威尔酵母PLAA (Phospholipase A2 Activating Protein) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  willianus

谢瓦散囊菌CKLF (Chemokine Like Factor) ELISA Kit 拉丁属名: Eurotium chevalieri

小克银汉霉C0CX37 (Connexin 37) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

植物乳杆菌PP14 (Placental Protein14) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  plantarum

酸鱼乳杆菌TEP1 (Telomerase Associated Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  acidipiscis

卷枝毛霉卷枝变型GMCSF/CSF2(Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor 2) ELISA Kit拉丁属名: Mucor circinelloides f. circinelloides

毛柄金钱菌(金针菇)PLP1 (Proteolipid Protein 1, Myelin) ELISA Kit 用途: 食用

黑曲霉GATA4 (GATA Binding Protein 4) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus  niger

大肠杆菌GDF5 (Growth Differentiation Factor 5) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia coli

大肠埃希氏菌ATF-1 (Activating Transcription Factor 1) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

粗皮侧耳（平菇）ANG III (Angiotensin III) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
改良安卡拉痘苗病毒探针法荧光定量PCR试剂盒规格SH3MD2/RNF142  环指蛋白142抗体1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮3-Methyl-1-phenyl-1H-pyrazol-5(4H)-one化学标准品 分 子 式: C10H10N2O 分 子 量: 174.1992

RNF93/ZNF178  环指蛋白93抗体石蒜裂碱Lycorenine中药标准品  分 子 式: C18H23NO4 分 子 量: 317.383

RNF13  环指蛋白13抗体香荆芥酚5-Isopropyl-2-methylphenol中药标准品  分 子 式: C10H14O 分 子 量: 150.21756

RNF14  环指蛋白14抗体饱和硫酸铵溶液(SAS)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

RNF15  环指蛋白15抗体Tris-乙酸电泳缓冲液(50×TAE)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

TRIM17/RNF16  环指蛋白16抗体青蒿素 M2H-Naphtho[8a,1-b]furan-2-one,

decahydro-9,10-dihydroxy-3,6,9-trimethyl-,

(3R,3aS,6R,6aS,9R,10R,10aS)-对照药材 分 子 式: C15H24O4 分 子 量: 268.34866

TRIM17/RNF16  环指蛋白16抗体五乙酸儿茶素酯2H-1-Benzopyran-3,5,7-triol,2-[3,4-bis(acetyloxy)phenyl]-3,4-dihydro-, 3,5,7-triacetate, (2R,3S)-对照药材 分 子 式: C25H24O11 分 子 量: