PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

CyberlindneraTXLNa (Taxilin Alpha ) ELISA Kit 拉丁属名: Cyberlindnera  jadinii

水生异常球菌CCL16 (Chemokine C-C-Motif Ligand 16) ELISA Kit拉丁属名: Deinococcus  aquaticus

稻黄杆菌Extein ELISA Kit用途: 联合固氮

产黄青霉8-epi-PGF2α (8-Epi-Prostaglandin F2 Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium chrysogenum

草木樨中华根瘤菌PDGFRβ (Platelet Derived Growth Factor Receptor Beta) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

细黄链霉菌TACR2 (Tachykinin Receptor 2) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces microflavus

湖北拟酵母CASP11 (Caspase 11) ELISA Kit拉丁属名: Pseudozyma  hubeiensis

NRRL B-2354 屎肠球菌（现2）AGR2 (Anterior Gradient Protein 2) ELISA Kit拉丁属名: Enterococcus faecium

苹果轮纹病BTA (Bladder Tumor Antigen) ELISA Kit用途: 病源研究

灰色链霉菌灰色亚种AMH (Anti-Mullerian Hormone) ELISA Kit  拉丁属名: Streptomyces griseus subsp. griseus

泽普林假丝酵母TCGF-Ⅲ (Tcell Growth Factor Ⅲ) ELISA Kit拉丁属名: Candida zemplinina

罗氏链霉菌Try2 (Trypsinogen II) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces rochei

金黄色葡萄球菌DAP6 (Death Associated Protein 6) ELISA Kit拉丁属名: aureus

总状毛霉EGR3 (Early Growth Response Protein 3) ELISA Kit 拉丁属名: Mucor racemosus

枯草芽孢杆菌MMP-3 (Matrix Metalloproteinase 3) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis
多态小小菌探针法荧光定量PCR试剂盒供应商ZNRF3  锌指蛋白3/环指蛋白3抗体琥珀酸钠溶液(1%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ZNRF4  锌指/环指蛋白4抗体11-O-罗汉果苷III11-Oxomogroside III化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

ZNF230/RNF141  锌指蛋白230抗体槐苦参醇，槐醇5-Hydroxymatrine化学标准品 分 子 式: C15H24N2O2 分 子 量: 264.36326

UBR2  泛素蛋白连接酶E3α2抗体RNase A(10mg/ml)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

UBOX5/RNF37  泛素结合酶7相互作用蛋白5抗体N-阿魏酰真蛸胺; N- 阿魏酰章鱼胺2-Propenamide,

N-[2-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-,

(2E)-化学标准品 分 子 式: C18H19NO5 分 子 量: 329.34716

TTC33  TTC33蛋白抗体1,4,7-桉叶烷三醇(4R,4aR,6S,8aR)-6-Isopropyl-4,8a-dimethyldecahydronaphthalene-1,4,6-triol对照药材 分 子 式: C15H28O3 分 子 量: 256.38102

TTC3/RNF105  环指蛋白105抗体鸢尾黄素5,7-Dihydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)-6-methoxy-4H-chromen-4-one中药标准品  分 子 式: C16H12O6 分 子 量: 300.26288