PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

枯草芽孢杆菌EP2 (Prostaglandin E Receptor 2 ) ELISA Kit  拉丁属名: Bacillus  subtilis

酿酒酵母FSHR (Follicle Stimulating Hormone Receptor) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

立枯丝核菌SMN1(Survival of Motor Neuron 1, Telomeric) ELISA Kit 用途: 进行分析检测及抗病性鉴定，指导 。

韩国灵芝α-Glu (Alpha Glucosidase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

玫瑰栗色链霉菌ELN (Elastin) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces  roseocastaneus

侧耳属SPA (Pulmonary Surfactant Associated Protein A) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

杆状毛霉GKN2 (Gastrokine 2) ELISA Kit 拉丁属名: Mucor bacilliformis

囊轴发仙菌囊轴亚种Surv (Survivin) ELISA Kit拉丁属名: Pilimelia columellifera subsp. columellifera

微菌核链霉菌IκBβ (Inhibitory Subunit of NF Kappa B Beta) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces minutiscleroticus

须芒草伯克霍尔德氏菌PKR2 (Prokineticin Receptor 2) ELISA Kit 拉丁属名: Burkholderia andropogonis

样品粉碎机CTLA4 (Cytotoxic T Lymphocyte Associated Antigen 4) ELISA Kit规格: 便携式

产紫青霉sCKR (Soluble Cytokine Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium purpurogenum

大肠埃希菌HSF2 (Heat Shock Transcription Factor 2) ELISA Kit 拉丁属名: coli

蘑菇β-CTx (Beta Crosslaps) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

Burkholderia anthinaFGF19 (Fibroblast Growth Factor 19) ELISA Kit用途: 固氮。
石膏样小孢子菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书Tankyrase  端粒调控因子抗体地黄苦苷1-Cyclohexene-1-carboxylicacid, 3-(b-D-glucopyranosyloxy)-2,6,6-trimethyl-,(3R)-化学标准品 分 子 式: C16H26O8 分 子 量:

ART5  二磷酸腺苷核糖基转移酶5抗体黄曲霉毒素G11H,12H-Furo[3',2':4,5]furo[2,3-h]pyrano[3,4-c][1]benzopyran-1,12-dione,3,4,7a,10a-tetrahydro-5-methoxy-, (7aR,10aS)-化学标准品 分 子 式: C17H12O7 分 子 量: 328.27298

ASB13  含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族13抗体乙醇溶液(75%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ASC2/POP1  感染性蛋白*蛋白1抗体DL-谷氨酸DL-Glutamic acid氨基酸类 分 子 式: C5H9NO4 分 子 量: 147.12926

ATAD3A/B/C  三磷酸腺苷酶家族蛋白3A抗体5-羟基-7-乙酰氧基黄酮5-Hydroxy-4-oxo-2-phenyl-4H-chromen-7-yl acetate对照药材 分 子 式: C17H12O5 分 子 量: 296.27418

MAP4K6/MINK1  丝裂原活化蛋白激酶MAP4K6抗体Tris-HCl缓冲液(1.5mol/L,pH8.8)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ATAD2  三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗体1,4-二氢-1,2-二甲基-4-氧代-3-喹啉羧酸1,2-Dimethyl-4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxylic acid对照药材 分 子 式: C12H11NO3 分 子 量: 217.22064