PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

黑根霉UBE1L (Ubiquitin Activating Enzyme E1 Like Protein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

解糖假苍白杆菌ANG II R2/AGTR2 (Angiotensin II Receptor 2) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudochrobactrum saccharolyticum

许旺酵母FPB (Fibrinopeptide B) ELISA Kit拉丁属名: Schwanniomyces  occidentalis

白僵菌β-LPH (β-Lipotropic Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Beauveria sp.

西蕃莲茎基腐病cPLA2 (Cytosolic Phospholipase A2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

赭曲霉CRT (Calreticulin) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus ochraceus

金黄色葡萄球菌MANF (Mesencephalic Astrocyte Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit拉丁属名: aureus

枯草芽孢杆菌IL-19 (Interleukin 19) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

枯草芽胞杆菌SAA2 (Serum Amyloid A2) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

瓜果腐霉NOS3/eNOS (Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial) ELISA Kit拉丁属名: Pythium aphanidermatum

香菇PC (Plasma Anticoagulant Protein C) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

水发光杆菌SHH (Hedgehog Homolog, Sonic) ELISA Kit 拉丁属名: Photobacterium aquae

苏云金芽胞杆菌印第安那亚种PRSS1 (Protease, Serine, 1) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus thuringiensis

解脂亚罗酵母OIT3 (Oncoprotein Induced Transcript 3) ELISA Kit 拉丁属名: Yarrowia  lipolytica

脆泊氏孔菌CNTNAP2 (Contactin Associated Protein Like Protein 2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
马立克氏病病毒2型探针法荧光定量PCR试剂盒 PAS1C1  核纤层蛋白A相关结构蛋白1抗体硫酸庆大霉素溶液(Gentamycin Sulfate,50mg/ml)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PBLD/MAWBP  MAWD结合蛋白抗体川楝素Toosendanin中药标准品  分 子 式: C30H38O11 分 子 量: 574.62

PCID1  PCID1蛋白抗体匹西狄醇ALanost-7-en-3-one,23,24,25-trihydroxy-, (13a,14b,17a,20S,23R,24S)-对照药材 分 子 式: C30H50O4 分 子 量:

PCID2  PCID2蛋白抗体三氯蔗糖Sucralose中药标准品  分 子 式: C12H19Cl3O8 分 子 量: 397.64

PDXK  吡哆醛激酶抗体罗丹明BRhodamine B中药标准品  分 子 式: C28H31N2O3.Cl 分 子 量: 479.02

PDZK1  PDZ结构域PDZK1蛋白抗体钩藤碱Rhynchophylline中药标准品  分 子 式: C22H28N2O4 分 子 量: 384.47

PDZK3  激活蛋白抗体Walpole乙酸缓冲液(0.01mol/L,pH3.373-6.777)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: