PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

酿酒酵母Monkey MMP-11 (Matrix Metalloproteinase 11) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

蜡样芽胞杆菌 (蜡状芽胞杆菌)Monkey FGF19 (Fibroblast Growth Factor 19) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  cereus

根瘤菌Monkey CYPD (Cyclophilin D) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

季也蒙假丝酵母Monkey PKCθ (Protein Kinase C Theta )ELISA Kit 拉丁属名: Candida  guilliermondii

病毒Monkey Surv (Survivin) ELISA Kit拉丁属名: Infectious       bursal disease virus

芽孢杆菌属Monkey ApoD (Apolipoprotein D) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  sp.

三叶草根瘤菌Monkey P-GP (Permeability Glycoprotein) ELISA Kit用途: 与白三叶草共生固氮

瓜亡革菌Monkey ADCY1 (Adenylate Cyclase 1, Brain) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

果生链核盘菌Monkey CA1 (Carbonic Anhydrase I) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

胶冻样芽胞杆菌Monkey FLNα (Filamin A, Alpha) ELISA Kit用途: 细菌肥料

*珊瑚菌（不是这个菌）Monkey RNASEH (Ribonuclease H )ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

沃氏富盐菌Monkey GUCA2A (Guanylate Cyclase Activator 2A) ELISA Kit拉丁属名: Haloferax  volcanii

链霉菌Monkey FcγBP (Fc Fragment of IgG Binding Protein) ELISA Kit 用途: 代谢产物具有抗菌活性。

节杆菌属Monkey ANG2 (Angiopoietin 2) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter  sp.

维多利亚维希尼克氏酵母Monkey PDE4D (Phosphodiesterase 4D, cAMP Specific) ELISA Kit拉丁属名: Vishniacozyma victoriae
住白细胞原虫属通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明书MtTF1  线粒体转录因子1抗体D-核糖(2R,3R,4R)-2,3,4,5-Tetrahydroxypentanal碳水化合物  分 子 式: C5H10O5 分 子 量: 150.1299

BarX1  BarX1蛋白抗体苍术苷钾盐19-Norkaur-16-en-18-oicacid, 15-hydroxy-2-[[2-O-(3-methyl-1-oxobutyl)-3,4-di-O-sulfo-b-D-glucopyranosyl]oxy]-,dipotassium salt, (2b,15a)- (9CI)中药标准品  分 子 式: C30H44K2O16S2 分 子 量:

GOLPH2/GP73  高尔基体膜蛋白GP73抗体菖蒲酮Shyobunone中药标准品  分 子 式: C15H24O 分 子 量: 220.4

phospho-CstF64(Ser83)  磷酸化细胞分裂相关蛋白CSTF64抗体植酸Fytic acid中药标准品  分 子 式: C6H18O24P6 分 子 量: 660.04

TET1/CXXC6  Ten-eleven转运基因1蛋白抗体异阿魏酸2-Propenoic acid,3-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)-, (2E)-化学标准品 分 子 式: C10H10O4 分 子 量:

Calcium Sensing Receptor/CaSR  钙敏感受体1抗体连翘酯苷EForsythoside E中药标准品  分 子 式: C20H30O12 分 子 量: 462.445

DNA Polymerase beta  DNA聚合酶β抗体阿卡波糖acarbose中药标准品  分 子 式: C25H43NO18 分 子 量: 645.61