PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

球形赖氨酸芽孢杆菌Monkey ApoA4 (Apolipoprotein A4) ELISA Kit拉丁属名: Lysinibacillus sphaericus

近平滑假丝酵母Monkey S100A9 (S100 Calcium Binding Protein A9) ELISA Kit拉丁属名: Candida parapsilosis

波兰青霉Monkey PTPRB (Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type B ) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium polonicum

缓慢葡萄球菌Monkey ADCY2 (Adenylate Cyclase 2) ELISA Kit拉丁属名: Staphylococcus lentus

酿酒酵母Monkey BMP-4 (Bone Morphogenetic Protein 4) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

植物乳杆菌Monkey ANGPTL4 (Angiopoietin Like Protein 4) ELISA Kit 拉丁属名: Lactobacillus  plantarum

赤曲霉Monkey LMWH (Low Molecular Weight Heparin) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus ruber

刺黑乌霉Monkey S100A11 (S100 Calcium Binding Protein A11) ELISA Kit  注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

烟色毛霉Monkey CMR (Costimulatory Molecules Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Mucor fumosus

嗜热链球菌Monkey OXA (Orexin A) ELISA Kit拉丁属名: Streptococcus  thermophilus

Aquibacillus halophilusMonkey BLI (β-Lactamase Inhibitors) ELISA Kit拉丁属名: Aquibacillus halophilus

角鳞灰鹅膏菌Monkey HTRA1 (HtrA Serine, Peptidase 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

镰孢菌Monkey SPD (Pulmonary Surfactant Associated Protein D) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

泡囊短波单胞菌Monkey VPI (Vasoactive Peptidase Inhibitors) ELISA Kit拉丁属名: Brevundimonas vesicularis

溜曲霉Monkey CXCR1 (CXC-Chemokine Receptor 1) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  tamarii
劳森菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒规格BPIL2  杀菌/通透性增加蛋白样2抗体地弗地衣酸Benzoic acid,2,4-dimethoxy-3,6-dimethyl-, 4-carboxy-3-hydroxy-2,5-dimethylphenyl ester化学标准品 分 子 式: C20H22O7 分 子 量: 374.38448

BPIL3  杀菌/通透性增加蛋白样3抗体异莪术烯醇Isocurcumenol中药标准品  分 子 式: C15H22O2 分 子 量: 234.33398

BRD1  BRD1蛋白抗体玉米黄素(3R,3'R)-BETA,BETA-CAROTEN-3,3'-DIOL中药标准品  分 子 式: C40H56O2 分 子 量: 568.88

BRP44  脑蛋白44抗体石斛碱7,5-(Epoxymethano)-1H-cyclopent[cd]indol-9-one,decahydro-1,7b-dimethyl-6-(1-methylethyl)-, (2aS,4aS,5R,6S,7R,7aS,7bR)-中药标准品  分 子 式: C16H25NO2 分 子 量: 263.3752

BRP44L  脑蛋白44样蛋白抗体苯甲酰次乌头碱Benzoylhypacoitine化学标准品 分 子 式: C31H43NO9 分 子 量: 573.29

BRPF3  BRPF3蛋白抗体诃子宁b-D-Glucopyranose,1-(3,4,5-trihydroxybenzoate), cyclic 2®2:4®1-ester with (2S)-2-[(3S,4S)-5-carboxy-3,4-dihydro-3,7,8-trihydroxy-2-oxo-2H-1-benzopyran-4-yl]butanedioicacid化学标准品 分 子 式: C27H24O19 分 子 量: 652.46806

LMO2  T淋巴细胞易位蛋白2抗体雅姆皂苷元yamogenin中药标准品  分 子 式: C27H42O3 分 子 量: 414.62