PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

产朊假丝酵母SFRP2 (Secreted Frizzled Related Protein 2) ELISA Kit用途: 饲料发酵

灵芝(赤芝，红灵芝)LGALS3 (Lectin-Galactoside Binding Soluble 3) ELISA Kit拉丁属名: Ganoderma  lucidium

德斯霉F9 (Coagulation Factor Ⅸ) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

栗疫菌βMSH (beta-Melanocyte Stimulating Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Cryphonectria parasitica

节杆菌CABIN1 (Calcineurin Binding Protein 1) ELISA Kit 拉丁属名: Arthrobacter sp.

酿酒酵母MAPK14 (Mitogen Activated Protein Kinase 14) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

篮状菌属Pax (Paxillin) ELISA Kit拉丁属名: Talaromyces sp.

李氏拟诺卡氏菌EAR12 (Eosinophil Associated Ribonuclease A family Member 12) ELISA Kit拉丁属名: Nocardiopsis listeri

淡紫拟青霉菌GDF15 (Growth Differentiation Factor 15) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠杆菌PTGIS (Prostaglandin I Synthase) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

雅致放射毛霉α1-AGP (Alpha-1-Acid Glycoprotein) ELISA Kit

拉丁属名: Actinomucor  elegans

香菇Bcl-3 (B-cell Leukemia/Lymphoma 3) ELISA Kit 用途: 食用、药用

平凡假单胞菌PLVAP (Plasmalemma Vesicle Associated Protein) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  trivialis

茎点霉属 PDGFRL (Platelet Derived Growth Factor Receptor Like Protein) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

簇生离褶伞CDX2 (Caudal Type Homeobox Transcription Factor 2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
灰马杜拉分枝菌探针法荧光定量PCR试剂盒 ERM/Etv5  转录因子Ets差异基因5抗体(-)-扁柏脂素，荜澄茄内脂2(3H)-Furanone,3,4-bis(1,3-benzodioxol-5-ylmethyl)dihydro-, (3R,4R)-化学标准品 分 子 式: C20H18O6 分 子 量: 354.35332

UGCG/Ceramide glucosyltransferase  葡萄糖神经酰胺合成酶抗体原钒酸钠溶液(NaVO4,0.1mol/L)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ACTBL1/Ovary  卵巢、胎盘、、睾丸蛋白22抗体去氧脱水穿心莲内酯2(5H)-Furanone,3-[2-[(1R,4aS,5R,6R,8aS)-decahydro-6-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-5,8a-dimethyl-2-methylene-1-naphthalenyl]ethyl]-化学标准品 分 子 式: C20H30O4 分 子 量:

C9orf72  9号染色体开放阅读框72抗体阿多尼弗林碱2H-1a,5-Methano-4H-oxireno[12,13][1,5,10]trioxacyclotetradecino[6,7,8-gh]pyrrolizine-6,15(5H,15aH)-dione,7a,8,9,11,12b,13-hexahydro-5-hydroxy-4,15a-dimethyl-, (7aR,12bR)-中药标准品  分 子 式: C18H23NO7 分 子 量:

TAS2R7/T2R6  味觉感受器蛋白T2R6抗体Lup-20(29)-en-28-oic acid, 3-[β-D-glucopyranosyl(1→4)[a-L-rhamnopyranosyl) (1→2)-a -L-arabinopyranosyl]oxy], (3β,4a)-)Lup-20(29)-en-28-oic acid,

3-[(O-6-deoxy-a-L-mannopyranosyl-(1?2)-O-[b-D-glucopyranosyl-(1?4

)]-a-L-arabinopyranosyl)oxy]-, (3b)-中药标准品  分 子 式: C47H76O16 分 子 量:

Annexin I  膜粘连蛋白 I抗体二羟丙茶碱ACoronarin A对照药材 分 子 式: C20H28O2 分 子 量: 300.43512

GPR70/T1R1  蛋白偶联受体70抗体人参皂苷Rk2Ginsenoside RK2中药标准品  分 子 式: C36H60O7 分 子 量: 604.8574