PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

谷氨酸棒杆菌Monkey ANG (Angiostatin) ELISA Kit拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum

层迭灵芝Monkey CLA/CTAGE (Cutaneous Lymphocyte Associated Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Ganoderma lobatum

微金放线菌Monkey IL1R1 (Interleukin 1 Receptor Type I) ELISA Kit 拉丁属名: Actinomyces  aurigineus

约翰逊锁掷孢酵母Monkey MAF (Macrophage Activating Factor) ELISA Kit拉丁属名: Sporidiobolus johnsonii

木拉克酵母Monkey REG1α (Regenerating Islet Derived Protein 1 Alpha) ELISA Kit 用途: 饲料用酶的筛选

粘孢白僵菌Monkey TAT (Thrombin/Antithrombin Complex) ELISA Kit用途: 害虫生物防治

枯草芽孢杆菌Monkey FASN (Fatty Acid Synthase) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

屎肠球菌Monkey CTNNβ1 (Catenin, Beta 1) ELISA Kit 拉丁属名: Enterococcus  faecium

芽孢杆菌属Monkey CCR8 (Chemokine C-C-Motif Receptor 8) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  sp.

肿大地杆菌Monkey 6-OHDA (6-Hydroxydopamine) ELISA Kit拉丁属名: Terrabacter terrae

地霉双足囊菌Monkey C/EBPα (CCAAT/Enhancer Binding Protein Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Dipodascus geotrichum

棒状乳杆菌棒状亚种Monkey ACCPA (anti-cyclic citrullinated peptide antibody) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  coryniformis subsp. coryniformis

细极链格孢Monkey Ta1 (Thymosin-α1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

气生鞘氨单胞菌Monkey PS1 (Presenilin 1) ELISA Kit拉丁属名: Sphingomonas aerolata

三叶草根瘤菌Monkey PACAP-38 (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide 38) ELISA Kit用途: 与三叶草共生固氮
单核细胞增生李斯特菌探针法荧光定量PCR试剂盒 EP4R/Prostaglandin E Receptor EP4  素E受体蛋白4抗体Ophiopojaponin C中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

Luciferase  荧光素酶抗体乙酰桉树素Eucalyptin acetate化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

TSHZ3/ZNF537  锌指蛋白537抗体脱氢紫堇碱Dehydrocorydaline中药标准品  分 子 式: C22H24NO4+.Cl- 分 子 量: 401.88326

CLECSF9/CLEC 4E  C型凝集素4家族E抗体王不留行环肽ASegetalin A中药标准品  分 子 式: C31H43N7O6 分 子 量: 609.71642

MSH3  错配修复蛋白3抗体乙酸钠溶液(3mol/L,pH5.2,无菌)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PPY/Pancreatic hormone  胰腺激素抗体丙酮酸2-Oxopropanoic acid化学标准品 分 子 式: C3H4O3 分 子 量: 88.06206

GABR B3/GABA A Receptor beta 3  G氨基丁酸受体3抗体九里香亭，九里香素，长叶九里香内酯二醇2H-1-Benzopyran-2-one,8-[(1R,2S)-1,2-dihydroxy-3-methyl-3-buten-1-yl]-7-methoxy-, rel-(-)-对照药材 分 子 式: C15H16O5 分 子 量: 276.28454