PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

加利福尼亚拟威尔酵母Monkey CA125 (Carbohydrate Antigen 125) ELISA Kit  拉丁属名: Williopsis californica

竹生炭角菌Monkey CK-19/KRT19 (Cytokeratin 19) ELISA Kit拉丁属名: Xylaria bambusicola

雪腐微座孢Monkey ACTN2 (Actinin Alpha 2) ELISA Kit拉丁属名: Microdochium nivale

发酵乳杆菌Monkey EFNA1 (Ephrin A1) ELISA Kit 拉丁属名: Lactobacillus  fermentum

毛地黄壳针孢Monkey VASPIN (Visceral Adipose Specific Serine Protease Inhibitor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

弯孢菌Monkey PLA1 (Phospholipase A1) ELISA Kit用途: 研究

匍匐曲霉原变种Monkey PGDS (Prostaglandin D Synthase) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus repens var. repens

金橙黄微小杆菌Monkey APP (Amyloid Precursor Protein) ELISA Kit拉丁属名: Exiguobacterium aurantiacum

芽孢杆菌Monkey FAK (Focal Adhesion Kinase) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus atrophaeus

短波单胞菌属Monkey BTA (Bladder Tumor Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Brevundimonas staleyi

青春双歧杆菌Monkey EAR3 (Eosinophil Associated Ribonuclease A family Member 3) ELISA Kit拉丁属名: Bifidobacterium  adolensentis

匍枝根霉原变种Monkey BMP-2 (Bone Morphogenetic Protein 2) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus stolonifer var. stolonifer

枯草芽孢杆菌Monkey FOXP1 (Forkhead Box Protein P1) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  subtilis

藤黄浅藤黄链霉菌Monkey NXF1 (Nuclear RNA Export Factor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces luteolutescens

杂色曲霉Monkey PEX2 (Peroxisomal Biogenesis Factor 2) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus versicolor
问号钩端螺旋体探针法荧光定量PCR试剂盒说明书RFESD  RFESD蛋白抗体磷酸三钠洗液(5%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

RENBP  肾素结合蛋白抗体齿孔酸; 齿孔菌酸Lanost-8-en-21-oicacid, 3-hydroxy-24-methylene-, (3b)-化学标准品 分 子 式: C31H50O3 分 子 量: 470.7269

REG1β/REG1 beta  胰岛因子β抗体马钱苷酸LOGANIC ACID中药标准品  分 子 式: C16H24O10 分 子 量: 376.36

RED/CSA2  软相关蛋白2抗体郁金二酮4-Cyclohepten-1-one,6-methyl-2-(1-methylethylidene)-5-(3-oxobutyl)-, (6S)-化学标准品 分 子 式: C15H22O2 分 子 量:

ANGPT3/ANG3/ANGPT4/ANG4  生成素3/生成素4抗体Tris缓冲盐溶液(0.05mol/L,pH8.0)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

RFTN2  RFTN2蛋白抗体DL-苯丙氨酸DL-Phenylalanine化学标准品 分 子 式: C9H11NO2 分 子 量: 165.18914

RGAG4  RGAG4蛋白抗体水杨酸2-Hydroxybenzoic acid中药标准品  分 子 式: C7H6O3 分 子 量: 138.12074