PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

橙色杆菌属Monkey CNTNAP4 (Contactin Associated Protein 4) ELISA Kit 拉丁属名: Sandarakinorhabdus  arctica

贝伦格葡萄座腔菌梨生专化型Monkey PHC (Primary Hepatic Carcinoma)ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

豌豆根瘤菌Monkey LTD4 (Leukotriene D4) ELISA Kit用途: 与豌豆共生固氮

氧化节杆菌Monkey GOD (Glucose Oxidase) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter oxydans

细孢毛霉Monkey PMN Elastase (Polymorphonuclear Elastase) ELISA Kit拉丁属名: Mucor subtilissimus

植物乳杆菌植物亚种Monkey DHEA-S7 (Dehydroepiandrosterone S7) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  plantarum subsp. plantarum

吸水链霉菌Monkey ALT (Alanine Transaminase) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces hygroscopicus

pMV306hsp+LuxG13（addgene26161）Monkey SYP (Synaptophysin) ELISA Kit拉丁属名: pMV306hsp+LuxG13（addgene26161）

豌豆根瘤菌Monkey C4b (Complement Component 4b) ELISA Kit用途: 与豌豆、蚕豆、苕子共生固氮

枯草芽孢杆菌Monkey PIK3Cσ (Phosphoinositide-3-Kinase Catalytic Delta Polypeptide) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

立枯丝核菌Monkey CRY1 (Cryptochrome 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

多主葡萄壳菌Monkey CMLC-1 (Cardiac Myosin Light Chains 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

食鹿角菜假交替单胞菌Monkey β2-GP (Beta2 Glycoprotein) ELISA Kit拉丁属名: Pseudoalteromonas carrageenovora

番茄枯萎病菌Monkey TIMP-4 (Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 4) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

胶冻样类芽孢杆菌Monkey ERα (Estrogen Receptor Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Paenibacillus  mucilaginosus
七星库道虫探针法荧光定量PCR试剂盒规格BTBD10  BTB/POZ结构域蛋白10抗体原薯蓣皂苷Protodioscin中药标准品  分 子 式: C51H84O22 分 子 量: 1049.19946

BTBD17  BTB/POZ结构域蛋白17抗体羟基酪醇醋酸酯Hydroxytyrosol acetate中药标准品  分 子 式: C10H12O4 分 子 量: 196.202

ANGL2/ANGPTL2  生成素样蛋白2抗体氯化飞燕草素-3,5-O-二葡萄糖苷1-Benzopyrylium,3,5-bis(b-D-glucopyranosyloxy)-7-hydroxy-2-(3,4,5-trihydroxyphenyl)-,chloride (1:1)化学标准品 分 子 式: C27H31O17+.Cl- 分 子 量: 662.97784

BTBD19  BTB/POZ结构域蛋白19抗体千层纸素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷Oroxyloside中药标准品  分 子 式: C22H20O11 分 子 量: 460.3876

GCLC/GCLM  γ谷氨酰半胱氨酸合成酶抗体（γ-GCSc）5-羟基-4,7-二甲氧基黄酮5-Hydroxy-7-methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-4H-chromen-4-one对照药材 分 子 式: C17H14O5 分 子 量: 298.29006

GCOM1  GCOM1蛋白抗体泽泻醇 E 23-醋酸酯Alisol E 23-acetate化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

OGFOD2  末端多聚腺苷酸2蛋白抗体D-山梨醇(2R,3R,4R,5S)-Hexane-1,2,3,4,5,6-hexaol中药标准品  分 子 式: C6H14O6 分 子 量: 182.17176