PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

*胜利油田热甲烷微球菌Monkey HHIP (Hedgehog Interacting Protein) ELISA Kit 拉丁属名: Methermicoccus shengliensis

黑曲霉Monkey PRKG1 (Protein Kinase, cGMP Dependent Type I) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  niger

异配囊接霉Monkey GLTP (Glycolipid Transfer Protein) ELISA Kit 拉丁属名: Mucor heterogamus

热带盐水孢菌Monkey PLN (Phospholamban) ELISA Kit拉丁属名: Salinispora tropica

大肠杆菌Monkey CA12 (Carbonic Anhydrase XII) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

Wautersiella falseniiMonkey α-SCA (α-sarcomeric Actin) ELISA Kit拉丁属名: Wautersiella falsenii

假单胞菌Monkey SAA2 (Serum Amyloid A2) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas vranovensis

新月弯孢霉Monkey AGRN (Agrin) ELISA Kit拉丁属名: Cochliobolus lunatus

橡胶树假丝酵母Monkey TACR2 (Tachykinin Receptor 2) ELISA Kit拉丁属名: Candida heveicola

水生黄杆菌Monkey GREM1 (Gremlin 1) ELISA Kit 拉丁属名: Flavobacterium hydatis

日本根霉Monkey Try2 (Trypsinogen II) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus japonicus

嗜热链球菌Monkey MX1 (Myxovirus Resistance 1) ELISA Kit拉丁属名: Streptococcus  thermophilus

多主葡萄壳菌Monkey HSP-70/HSPA9 (Heat Shock Protein 70) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

海泥黄杆菌Monkey LAT (Linker For Activation of T-cell) ELISA Kit拉丁属名: Flavobacterium  oceanosedimentum

粗皮侧耳（平菇）Monkey IκBβ (Inhibitory Subunit of NF Kappa B Beta) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
牛鼻病毒探针法荧光定量PCR试剂盒说明书DPP9/DPRP2  二肽基肽酶9抗体竹红菌丙素1H-Cyclohepta[ghi]perylene-6,11-dione,3-acetyl-5,12-dihydroxy-4,8,9,13-tetramethoxy-2-methyl- (9CI)化学标准品 分 子 式: C30H24O9 分 子 量:

DPP8/DPRP1  二肽基肽酶8抗体连翘脂素Phenol,4-[(1S,3aR,4R,6aR)-4-(3,4-dimethoxyphenyl)tetrahydro-1H,3H-furo[3,4-c]furan-1-yl]-2-methoxy- 中药标准品  分 子 式: C21H24O6 分 子 量:

Matriptase 2  膜型丝氨酸蛋白酶2抗体野菊花内酯Yejuhualactone中药标准品  分 子 式: C32H40O8 分 子 量: 552.6552

CYBR1  细胞色素B还原酶1抗体氯化锂溶液(1mol/L,无菌)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

UQCRC1  辅酶细胞色素C还原酶核心蛋白1抗体番泻苷CSennoside C中药标准品  分 子 式: C42H40O19 分 子 量: 848.755600000001

TXNRD1  硫氧环蛋白还原酶1抗体蛋白快速银染试剂盒标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PRDX2/Peroxiredoxin-SO3  硫氧还蛋白过氧化物酶2碳酸氢钠溶液(7.4%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: