PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

灵芝Monkey PRKAα1 (Protein Kinase, AMP Activated Alpha 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

球芽孢杆菌Monkey ANGPTL6 (Angiopoietin Like Protein 6) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus globigii

弯孢菌Monkey CNR1 (Cannabinoid Receptor 1, Brain) ELISA Kit 用途: 研究

解淀粉芽孢杆菌Monkey CD4 (Cluster of Differentiation 4) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  amyloliquefaciens

灰黄青霉Monkey Pax (Paxillin) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium griseofulvum

云南假诺卡氏菌Monkey TPP (Thrombus Precursor Protein) ELISA Kit拉丁属名: Pseudonocardia yunnanensis

琥珀乳牛肝菌Monkey CLDN1 (Claudin 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

细刺囊壳Monkey PLSCR1 (Phospholipid Scramblase 1) ELISA Kit拉丁属名: Ascotricha pusilla

微小链霉菌Monkey KNG1 (Kininogen 1) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces parvulus

季也蒙假丝酵母Monkey TIMP-1 (Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 1) ELISA Kit拉丁属名: Candida guilliermondii

球毛壳菌（可订购）Monkey CX40 (Connexin 40) ELISA Kit 用途: 代谢产物

烟色小菌核链霉菌Monkey PTX 3/TSG-14 (Pentraxin 3, Long) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces fumigatiscleroticus

孟氏假单胞菌Monkey SSTR1 (Somatostatin Receptor 1) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  mandelii

假单胞菌Monkey Grb14 (Growth Factor Receptor Bound Protein 14) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas arsenicoxydans

草木樨中华根瘤菌Monkey SCG2 (Secretogranin II) ELISA Kit用途: 固氮
克雷伯菌探针法荧光定量PCR试剂盒规格UFC1  泛素结合酶UFC1抗体紫丹参素Cprzewaquinone C化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

UBCH6/UBE2E1  泛素蛋白连接酶E1抗体续随二萜醇中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

UBC6e/UBE2J1  泛素结合酶E2J1抗体3,5-二氯苯酚3,5-Dichlorophenol化学标准品 分 子 式: C6H4OCl2 分 子 量: 163.00136

UBE2A/UBE2B/RAD6  泛素结合酶E2蛋白A抗体芸苔素内酯epibrassinolide中药标准品  分 子 式: C28H48O6 分 子 量: 480.67712

RNF160/ZNF294  环指蛋白160抗体肉苁蓉苷ACistanoside A中药标准品  分 子 式: C36H48O20 分 子 量: 800.75

NFX1  核转录因子X盒结合蛋白1抗体胡薄荷酮Menthone中药标准品  分 子 式: C10H18O 分 子 量: 154.25

NCE2  泛素结合酶E2F抗体山麦冬皂苷BLiriopesides B中药标准品  分 子 式: C39H62O12 分 子 量: 722.90238