PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

宇佐美曲霉Monkey MYH1 (Myosin Heavy Chain 1, Skeletal Muscle, Adult) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus usamii Sakaguchi et al

热栗色链霉菌Monkey Extein ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces thermocastaneus

玉米黑粉菌Monkey Aβ1-42 (Amyloid Beta Peptide 1-42) ELISA Kit拉丁属名: Ustilago maydis

峨眉山链霉菌Monkey DSE (Dermatan Sulfate Epimerase) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces emeiensis

球孢白僵菌Monkey LDHA (Lactate Dehydrogenase A) ELISA Kit 拉丁属名: Beauveria bassiana

枯草芽孢杆菌Monkey RIPK2 (Receptor TNFRSF Interacting Serine Threonine Kinase 2) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

暗黄紫链霉菌Monkey CAM-Ab (Anti-Calmodulin Specific Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces fulvoviolaceus

枯草芽孢杆菌Monkey MPA (Mycophenolic Acid) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

浅紫灰链霉菌产色变种Monkey TNPO2 (Transportin 2) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces lavendulae var. chromogenes

佛罗里达侧耳Monkey VTN (Vitronectin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

溶血素 Monkey Grb7 (Growth Factor Receptor Bound Protein 7) ELISA Kit 规格: 0.5ml/100头份

雅致小克银汉霉Monkey SHH (Hedgehog Homolog, Sonic) ELISA Kit 拉丁属名: Cunninghamella elegans

马尔他布鲁氏菌Monkey PLGA (Plasminogen Activator) ELISA Kit规格: 冻干物

鸭疫里氏杆菌Monkey LRG1 (Leucine Rich Alpha-2-Glycoprotein 1) ELISA Kit拉丁属名: anatipestifer

乳糖细黄链霉菌Monkey OVA sIgG (Ovalbumin Specific IgG) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces  microflavus
产气克雷伯氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒供应商KLHDC8A  KLHDC8A蛋白抗体TD溶液(4×,pH7.4)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

KLHDC9  KLHDC9蛋白抗体新绿原酸Neochlorogenic acid中药标准品  分 子 式: C16H18O9 分 子 量: 354.31

LRRC2  LRRC2蛋白抗体去氢骆驼蓬碱7-Methoxy-1-methyl-9H-pyrido[3,4-b]indole中药标准品  分 子 式: C13H12N2O 分 子 量: 212.24718

LRRC59  LRRC59蛋白抗体(R型)原人参二醇中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

LRRC41  LRRC41蛋白抗体可的松Cortisone化学标准品 分 子 式: C21H28O5 分 子 量: 360.4492

NIPA  间变性激酶核相互作用伴侣蛋白抗体7,8-二羟基-4-苯基香豆素7,8-Dihydroxy-4-phenylcoumarin化学标准品 分 子 式: C15H10O4 分 子 量: 254.2375

phospho-NIPA(Ser354)  磷酸化间变性激酶核相互作用伴侣蛋白抗体2,6-二乙基苯胺(DEA)2,6-Diethylaniline化学标准品 分 子 式: C10H15N 分 子 量: 149.2328