PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

白曲霉Monkey MYBPC3 (Myosin Binding Protein C, Cardiac) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  candidus

黑曲霉Monkey CG (Chorionic Gonadotropin) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  niger

红灵芝Monkey HB (Hemoglobin) ELISA Kit拉丁属名: Ganoderma lucidum

米曲霉Monkey HLTF (Helicase Like Transcription Factor) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus  oryzae

干酪乳杆菌Monkey Flt3L(FMS Like Tyrosine Kinase 3 Ligand) ELISA Kit 拉丁属名: Lactobacillus  casei

屎肠球菌Monkey MYL9 (Myosin Light Chain 9, Regulatory) ELISA Kit用途: 环境除臭

大豆慢生根瘤菌Monkey HELIX-Ⅱ(Type Ⅱ Collagen Helical Peptide) ELISA Kit用途: 耐受pH4.5

皮尔瑞俄类芽孢杆菌Monkey Preptin ELISA Kit拉丁属名: Paenibacillus peoriae

苜蓿中华根瘤菌Monkey PDI (Protein Disulfide Isomerase) ELISA Kit用途: 与苜蓿共生固氮

多杀性巴氏杆菌Monkey C5c (Complement C5 Convertase) ELISA Kit拉丁属名: multocida

镰刀菌Monkey LOXL4 (Lysyl Oxidase Like Protein 4 ) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黄曲霉*Monkey FGFR1 (Fibroblast Growth Factor Receptor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus flavus

*灰葡萄孢Monkey RNASEN (Ribonuclease III, Nuclear) ELISA Kit用途: 进行分析检测及抗病性鉴定，指导 。

漫游孢囊菌属Monkey FGF23 (Fibroblast Growth Factor 23) ELISA Kit拉丁属名: Planosporangium mesophilum

枯草芽孢杆菌 BMonkey ApoC1 (Apolipoprotein C1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
猪等孢球虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒供应商PLDL1/PLCE  磷脂酶C1样蛋白抗体软脂酸-β-香树精酯Olean-12-en-3-ol,3-hexadecanoate, (3b)-对照药材 分 子 式: C46H80O2 分 子 量:

CPXCR1  /睾丸抗原77抗体P:C(25:24,pH﹥7.8)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PLTP  磷脂转移蛋白抗体(20R)-原人参二醇Protopanaxadiol化学标准品 分 子 式: C30H52O3 分 子 量: 460.73

TM9SF4  跨膜蛋白9家族成员4抗体甘油三酯Trilaurin化学标准品 分 子 式: C15H30O4.2[C12H23O2-] 分 子 量: 673.01594

RDH13  视黄醇脱氢酶13抗体7-乙酸-5,7-二羟基双氢黄酮酯(S)-5-Hydroxy-4-oxo-2-phenylchroman-7-yl acetate对照药材 分 子 式: C17H14O5 分 子 量: 298.29006

NIMP/RTN4IP1  NOGO相互作用线粒体蛋白1抗体苍术酮(4aS,8aR)-3,8a-Dimethyl-5-methylene-4,4a,5,6,7,8,8a,9-octahydronaphtho[2,3-b]furan中药标准品  分 子 式: C15H20O 分 子 量: 216.3187

TMEM173  跨膜蛋白173抗体攀登鱼藤异黄酮2H,6H-Benzo[1,2-b:5,4-b']dipyran-6-one,5-hydroxy-7-(4-hydroxyphenyl)-2,2-dimethyl-10-(3-methyl-2-buten-1-yl)-对照药材 分 子 式: C25H24O5 分 子 量: 404.45506