PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

髓囊毕赤酵母Monkey CAMK2α (Calcium/Calmodulin Dependent Protein Kinase II Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Kuraishia capsulata

聚贪噬菌Monkey DLK-1 (Delta Like 1 Homolog) ELISA Kit拉丁属名: Variovorax  boronicumulans

芽孢乳酸菌干粉Monkey MIP-1β (Macrophage Inflammatory Protein 1 Beta) ELISA Kit 拉丁属名: 芽孢乳酸菌干粉

酿酒酵母Monkey MR (Mannose Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

豌豆根瘤菌Monkey α2-M (Alpha-2 Macroglobulin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

微白黄链霉菌Monkey TUBα3C (Tubulin Alpha 3c )ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces albidoflavus

河北链霉菌Monkey GATA2 (GATA Binding Protein 2) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces hebeiensis

费氏中华根瘤菌Monkey INSR (Insulin Receptor) ELISA Kit用途: 能与我国栽培大豆共生固氮

大肠埃希菌Monkey MMP-17 (Matrix Metalloproteinase 17) ELISA Kit 拉丁属名: coli

酿酒酵母Monkey CaSR (Calcium Sensing Receptor) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

芽枝状枝孢Monkey CD97 (Cluster of Differentiation 97) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

葡糖酸醋杆菌属Monkey IAPP (Islet Amyloid Polypeptide) ELISA Kit拉丁属名: Gluconacetobacter  sp.

杂色曲霉Monkey ANG1 (Angiopoietin 1) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus versicolor

球孢白僵菌Monkey IL-11 (Interleukin 11) ELISA Kit用途: 生物防治

栗疫菌Monkey OSMR (Oncostatin M Receptor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
人病毒33探针法荧光定量PCR试剂盒说明书RB1CC1  RB1的诱导卷曲蛋白RB1CC1抗体磺胺对甲氧嘧啶4-Amino-N-(5-methoxypyrimidin-2-yl)benzenesulfonamide化学标准品 分 子 式: C11H12N4O3S 分 子 量: 280.30298

COX5A  细胞色素c氧化酶5A抗体虫草素Cordycepin中药标准品  分 子 式: C10H13N5O3 分 子 量: 251.24

CHCHD6  卷曲螺旋结构域蛋白CHCHD6抗体罗汉果苷VIMogroside VI中药标准品  分 子 式: C66H112O34 分 子 量: 1449.57508

GTF2B  通用转录因子GTF2B抗体巨大戟醇-3-O-当归酸酯Ingenol-3-angelate中药标准品  分 子 式: C25H34O6 分 子 量: 430.53386

CBX1/HP1 β  异染色体同源蛋白1抗体大麻螺醇Spiro[cyclohexane-1,1'-[1H]indene]-4,7'-diol,2',3'-dihydro-5'-methoxy-, cis-对照药材 分 子 式: C15H20O3 分 子 量: 248.3175

KMT3B/NSD1/ARA267  组蛋白甲基化KMT3B抗体（雄激素受体激活蛋白）肉桂酸trans-Cinnamic acid中药标准品  分 子 式: C9H8O2 分 子 量: 148.15862

NFIC  核因子1C型抗体去甲布拉易林Norbraylin对照药材 分 子 式: C14H12O4 分 子 量: 244.24268