PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

平菇Monkey IL-24 (Interleukin 24) ELISA Kit用途: 食用菌

地衣芽孢杆菌Monkey DEFα5 (Defensin Alpha 5, Paneth Cell Specific) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  licheniformis

迂回壳囊孢Monkey C7 (Complement Component 7) ELISA Kit用途: 植物病原物；用于该菌种群演化与流行学监测

香菇Monkey MASP (Mannan Binding Lectin Associated Serine Protease) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

双孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)Monkey PDIA6 (Protein Disulfide Isomerase A6) ELISA Kit拉丁属名: Agaricus bisporus (Lange) Singer

双环林地蘑菇Monkey PIR (Pirin) ELISA Kit 用途: 可食或有毒、菌根菌

地衣芽胞杆菌Monkey BLVRB (Biliverdin Reductase B) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus licheniformis

后藤假丝酵母Monkey ADAMTS4 (ADAM with Thrombospondin Type 1 Motif4) ELISA Kit拉丁属名: Candida gotoi

大肠杆菌Monkey TPPP (Tubulin Polymerization Promoting Protein) ELISA Kit用途: 潮霉素（hphr）抗性盒

詹氏酸杆菌Monkey TREM-1 (Triggering Receptor Expressed on Myeloid Cells-1) ELISA Kit拉丁属名: Propionibacterium jensenii

酿酒酵母Monkey CgB (Chromogranin B) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

链格孢Monkey AZU1 (Azurocidin 1) ELISA Kit 用途: 教学科研

厚垣孢普可尼亚菌Monkey ATA (Angiotensinase A) ELISA Kit用途: 用作生物防治研究

露湿漆斑菌Monkey AR (Amphiregulin) ELISA Kit拉丁属名: Myrothecium roridum Tode

乳酸片球菌Monkey HbH (Hemoglobin H) ELISA Kit拉丁属名: Pediococcus  acidilactici
人病毒6型探针法荧光定量PCR试剂盒说明书CCDC112/MBC1  突变蛋白1抗体盐酸西替利嗪2-(2-(4-((4-Chlorophenyl)(phenyl)methyl)piperazin-1-yl)ethoxy)acetic acid dihydrochloride化学标准品 分 子 式: C21H25N2O3Cl.2[HCl] 分 子 量: 461.80968

CCDC82  卷曲螺旋结构域蛋白82抗体鞣酸/单宁酸水溶液(5%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CCDC68/se57-1  卷曲螺旋结构域蛋白68抗体(皮肤T淋巴细胞相关抗原)标准蛋白质溶液(BSA,1mg/ml)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CCDC83  卷曲螺旋结构域蛋白83抗体beta-澳洲茄边碱b-D-Glucopyranoside, (3b,22a,25R)-spirosol-5-en-3-yl 4-O-(6-deoxy-a-L-mannopyranosyl)-化学标准品 分 子 式: C39H63NO11 分 子 量: 721.91762

CCDC120  卷曲螺旋结构域蛋白120抗体氯化钙溶液(60mmol/L)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CCDC23  卷曲螺旋结构域蛋白23抗体革兰阳性菌裂解缓冲液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CCDC136/NAG6  相关蛋白6抗体3-氧代乌索烷-12-烯-28-羧酸3-Oxours-12-en-28-oic acid中药标准品  分 子 式: C30H46O3 分 子 量: 454.68