PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

突孢毛壳Monkey GSANA (Granulocyte Specific Anti-Nuclear Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Chaetomium murorum

产黄青霉Monkey sAC (Soluble Adenylate Cyclase) ELISA Kit用途: 教学科研

大肠埃希菌Monkey TWEAK (Tumour Necrosis Factor Related Weak Inducer of Apoptosis) ELISA Kit拉丁属名: coli

季也蒙假丝酵母Monkey EloA (Elongin A) ELISA Kit拉丁属名: Candida  guilliermondii

巴西果小克银汉霉Monkey IL-2Rα (Interleukin 2 Receptor Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Cunninghamella bertholletiae

Pseudomonas tremaeMonkey NUP214 (Nucleoporin 214kDa) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

吉氏根瘤菌Monkey MUC7 (Mucin 7) ELISA Kit拉丁属名: Rhizobium  giardinii

洋葱伯克霍尔德氏菌Monkey NAGase (N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase) ELISA Kit 拉丁属名: Burkholderia cepacia

出芽短梗霉Monkey MAU (Microalbuminuria) ELISA Kit拉丁属名: Aureobasidium  pullulans

异常威克汉姆酵母Monkey I-TAC (Interferon Inducible T-cell Alpha Chemoattractant) ELISA Kit拉丁属名: Wickerhamomyces anomalus

大肠埃希氏菌Monkey CCP (Complement Control Protein) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

黑曲霉Monkey MUC3 (Mucin 3) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  niger

CystofilobasidiumMonkey TPA (Tissue Polypeptide Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Cystofilobasidium  capitatum

黑曲霉Monkey TG (Thyroglobulin) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus  niger

球孢白僵菌Monkey αMSH (Alpha-Melanocyte Stimulating Hormone) ELISA Kit用途: 害虫生物防治
副鸡嗜血杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 RACGAP1  Rho GTP酶激活蛋白GAP抗体金胺-酚染色液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

phospho-RACGAP1(Ser387)  磷酸化Rho GTP酶激活蛋白GAP抗体高三尖杉酯碱homoharringtonine中药标准品  分 子 式: C29H39NO9 分 子 量: 545.63

RCC2  染色体浓缩调节蛋白2抗体α-倒捻子素1,3,6-Trihydroxy-7-methoxy-2,8-bis(3-methylbut-2-en-1-yl)-9H-xanthen-9-one化学标准品 分 子 式: C24H26O6 分 子 量: 410.45964

SEPT1  细胞分化蛋白SEP1抗体多烯紫杉醇Taxotere中药标准品  分 子 式: C43H53NO14 分 子 量: 807.88

SEPT10  细胞分化蛋白SEPT10抗体2-O-beta-D-吡喃阿洛糖甙-2,16,19-贝壳杉烯三醇2,16,19-Kauranetriol 2-O-beta-D-allopyranoside对照药材 分 子 式: C26H44O8 分 子 量: 484.62276

SEPT12  细胞分化蛋白SEPT12抗体氨水溶液(0.3%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

SEPT14  细胞分化蛋白SEPT14抗体软骨素硫酸钠盐Chondroitin sulfate sodium salt化学标准品 分 子 式: C14H22NO16S-.Na+ 分 子 量: 515.37638