PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

嗜酸乳杆菌Monkey WARS (Tryptophanyl tRNA Synthetase) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  acidophilus

彩色豆马勃Monkey FcaR (Fc Fragment of IgA Receptor) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

游动球菌Monkey FGF21(Fibroblast Growth Factor 21) ELISA Kit拉丁属名: Planococcus  sp.

小粒凯斯特亚菌Monkey LR (Leukoregulin) ELISA Kit拉丁属名: Kaistia granuli

Patulibacter americanusMonkey VEGFR3/Flt4 (Vascular Endothelial Cell Growth Factor Receptor 3) ELISA Kit 拉丁属名: Patulibacter americanus

大肥菇Monkey AGER (Advanced Glycosylation End Product Specific Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Agaricus bitorquis

卷枝毛霉卷枝变型Monkey PRSS (Serine Protease) ELISA Kit拉丁属名: Mucor circinelloides f. circinelloides

解淀粉芽孢杆菌Monkey MFI2 (Melanotransferrin) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  amyloliquefaciens

大豆慢生根瘤菌Monkey GBP4 (Guanylate Binding Protein 4) ELISA Kit用途: 耐受pH4.2

黏连环纹炭团菌Monkey EPI (Epinephrine/Adrenaline) ELISA Kit拉丁属名: Annulohypoxylon cohaerens

香菇Monkey FGL1 (Fibrinogen Like Protein 1) ELISA Kit 用途: 食用、药用，

球形赖氨酸芽孢杆菌Monkey BMPR1A (Bone Morphogenetic Protein Receptor, type IA) ELISA Kit拉丁属名: Lysinibacillus sphaericus

猪丝菌Monkey TGM1 (Transglutaminase 1, Keratinocyte) ELISA Kit拉丁属名: rhuriopathiae

多主枝孢Monkey GHRH (Growth Hormone Releasing Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Cladosporium herbarum

酿酒酵母Monkey CG (Cryoglobulin) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae
人鼻病毒通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明书CTDSPL  CTDSPL蛋白抗体岩藻黄质Fucoxanthin中药标准品  分 子 式: C42H58O6 分 子 量: 658.91

CTDSPL2  CTDSPL2蛋白抗体紫堇米定碱Corlumidine化学标准品 分 子 式: C20H19NO6 分 子 量: 369.36796

CUEDC1  CUE结构域蛋白1抗体松茋Phenol,3-[(1E)-2-(4-hydroxyphenyl)ethenyl]-5-methoxy-中药标准品  分 子 式: C15H14O3 分 子 量: 242.26986

CA XI/Carbonic Anhydrase XI  碳酸酐酶11抗体毡毛美洲茶素4H-1-Benzopyran-4-one,5-hydroxy-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-7-methoxy-对照药材 分 子 式: C17H14O6 分 子 量: 314.28946

Alpha casein  α酪蛋白抗体去亚甲基小檗碱Demethyleneberberine中药标准品  分 子 式: C19H18NO4+ 分 子 量: 324.35052

CADM2/IGSF4D/Cell adhesion molecule 2  细胞粘附分子2纤细薯蓣皂苷gracillin中药标准品  分 子 式: C15H20O3 分 子 量: 248.32

COBL/Cordon bleu homolog  -综合征相关COBL蛋白抗体山麦冬皂苷BSpicatoside B化学标准品 分 子 式: C39H62O12 分 子 量: 722.90