PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

沙漠毕赤酵母Monkey RELB (V-Rel Reticuloendotheliosis Viral Oncogene Homolog B) ELISA Kit拉丁属名: Pichia deserticola

灰色链霉菌Monkey DDC (Dopamine Decarboxylase) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces griseus

点枝顶孢Monkey Smad1/MADH1 (Mothers Against Decapentaplegic Homolog 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

阿舒假囊酵母Monkey LCN1 (Lipocalin 1) ELISA Kit用途: 核黄素(Vitamin2)产生菌

朱红丛赤壳Monkey CD30L (Cluster of Differentiation 30 Lligand) ELISA Kit 拉丁属名: Nectria cinnabarina

*虫拟蜡菌Monkey ADA (Adenosine Deaminase) ELISA Kit拉丁属名: Ceriporiopsis Subvermispora

棒弯孢Monkey TXLNa (Taxilin Alpha ) ELISA Kit 拉丁属名: Curvularia clavata B.L. Jain

白腐菌Monkey PLD2 (Phospholipase D2) ELISA Kit用途: 饲料用酶的筛选

炭疽刺盘孢菌Monkey INSL5 (Insulin Like Protein 5) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

仁果丛梗孢Monkey FSH (Follicle-Stimulating Hormone) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌Monkey CASP 9 (Caspase 9) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

冷海希瓦氏菌Monkey DPP4 (Dipeptidyl Peptidase IV) ELISA Kit拉丁属名: Shewanella  frigidimarina

费氏中华根瘤菌Monkey ANXA2 (Annexin A2) ELISA Kit用途: 产酸，能与我国栽培大豆共生固氮

肉座菌属Monkey NPHN (Nephrin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大黄欧文氏菌Monkey GSTω1 (Glutathione S Transferase Omega 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
人多瘤病毒6探针法荧光定量PCR试剂盒说明书CTAGE4  皮肤T细胞相关抗原4抗体Delta 7-avenasterolStigmasta-7,24(28)-dien-3-ol,(3b,*,24Z)-化学标准品 分 子 式: C29H48O 分 子 量: 412.69082

FAM40A  FAM家族蛋白40A抗体苦鬼臼毒素Picropodophyllin中药标准品  分 子 式: C22H22O8 分 子 量: 414.40528

FAM120B  组织激活过氧化酶活化增生受体γ蛋白抗体氨基黑10B染色液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

FAM55D  FAM55D蛋白抗体藏红花酸Crocetin中药标准品  分 子 式: C20H24O4 分 子 量: 328.40216

TAAL6  相关蛋白抗原L6抗体三叶豆紫檀苷TRIFOLIRHIZIN中药标准品  分 子 式: C22H22O10 分 子 量: 446.4

FAM46C  FAM46C蛋白抗体3,4-二甲氧基苯甲酸3,4-Dimethoxybenzoic acid脂肪酸类 分 子 式: C9H10O4 分 子 量: 182.1733

FAM168A/TCRP1  舌癌耐药相关蛋白1四氢姜黄素Tetrahydrocurcumin中药标准品  分 子 式: C21H24O6 分 子 量: 372.41166