PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

枯草芽胞杆菌Monkey GP-73 (Golgi Protein 73) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

酿酒酵母Monkey M-AChR (Muscarinic Acetylcholine Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

朱红丛赤壳Monkey GHR (Growth Hormone Receptor) ELISA Kit 拉丁属名: Nectria cinnabarina

长双歧杆菌Monkey ANGPTL2 (Angiopoietin Like Protein 2) ELISA Kit 拉丁属名: Bifidobacterium  longum

小单孢菌Monkey AIM2 (Absent In Melanoma 2) ELISA Kit拉丁属名: Micromonospora sp.

枯草芽孢杆菌Monkey GP4 (Platelet Membrane Glycoprotein IV) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

酿酒酵母Monkey PPAR-δ (Peroxisome Proliferator Activated Receptor Delta) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

刺孢篮状菌Monkey MUC5AC (Mucin 5 Subtype AC) ELISA Kit拉丁属名: Talaromyces aculeatus

壳菌Monkey UGCG (UDP-glucose ceramide glucosyltransferase) ELISA Kit用途: 植物病原物；用于该菌种群演化与流行学监测。

干草寒冷杆菌Monkey FABP1 (Fatty Acid Binding Protein 1, Liver) ELISA Kit拉丁属名: Frigoribacterium  faeni

大肠埃希氏菌Monkey GUSβ (β-glucuronidase) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia  coli

沼泽红假单胞菌Monkey PLA2G12B (Phospholipase A2, Group XII B) ELISA Kit拉丁属名: Rhodopseudomonas palustris

纳塔尔链霉菌Monkey FE (Ferritin) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces barkulensis

大肠埃希氏菌Monkey UreC (Urease Related Protein C) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia  coli

四脊裸胞壳Monkey GTEAGE (Glomerular Tissue Extract Advanced Glycosylation End Products) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
人病毒16探针法荧光定量PCR试剂盒 FAM50A  FAM50A蛋白抗体水饱和酚(Phenol Water)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

FAM134C  FAM134C蛋白抗体大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷1-Hydroxy-3-methoxy-6-methyl-8-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)anthracene-9,10-dione中药标准品  分 子 式: C22H22O10 分 子 量: 446.40408

Histone H2A.Z/ H2AFZ  组蛋白H2AZ抗体达卡巴嗪dacarbazine中药标准品  分 子 式: C6H10N6O 分 子 量: 182.18

GM130  高尔基体自身蛋白GM130抗体Orth固定液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

FBRSL1  病毒X蛋白反转录蛋白9抗体栀子苷Geniposid中药标准品  分 子 式: C17H24O10 分 子 量: 388.37

GMRP1/BTBD10  糖代谢相关蛋白1抗体硫酸阿托品atropine sulphate化学标准品 分 子 式: 2(C17H23NO3).H2SO4 分 子 量: 676.82

BTBD1/HCV NS5A transactivated protein 8  丙毒NS5A反转录蛋白8抗体普拉洛芬Pranoprofen中药标准品  分 子 式: C15H13NO3 分 子 量: 255.27