PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

香菇Monkey CRHBP (Corticotropin Releasing Hormone Bingding Protein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

嗜线虫致病杆菌Monkey IgA2 (Immumoglobulin A2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

松口蘑Monkey MK (Midkine) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

人参土地杆菌Monkey Tyk-2 (Tyrosine Kinase 2) ELISA Kit拉丁属名: Pedobacter ginsengisoli

Monkey MN (Metanephrine) ELISA Kit拉丁属名: Acinetobacter bereziniae Nemec et al.

地衣芽孢杆菌Monkey GlyCAM1 (Glycosylation Dependent Cell Adhesion Molecule 1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus licheniformis

Sphingomonas koreensisMonkey PP (Pepsin) ELISA Kit拉丁属名: Sphingomonas koreensis

球孢白僵菌Monkey HSF2 (Heat Shock Transcription Factor 2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

果生链核盘菌Monkey SPJ (Surfactant Associated Protein J) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

白僵菌Monkey PLA2G4D (Phospholipase A2, Group IV D) ELISA Kit用途: 害虫生物防治

孟氏假单胞菌Monkey MIP-1α (Macrophage Inflammatory Protein 1 Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas  mandelii

PL110 杂3（灰平）Monkey MUSK (Muscle Skeletal Receptor Tyrosine Kinase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

环状芽胞杆菌Monkey CD30 (Cluster of Differentiation 30) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus circulans

猴头Monkey TE (Telomerase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

慢生根瘤菌Monkey ATF7 (Activating Transcription Factor 7) ELISA Kit用途: 与胡枝子共生固氮
火鸡病毒探针法荧光定量PCR试剂盒说明书ARSA  芳香基硫酸酯酶1抗体脱氧胆酸钠溶液(10%,pH7.0)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ATE1  精氨酸tRNA的蛋白转移酶1抗体乙酰缬草三酯Butanoic acid,3-(acetyloxy)-3-methyl-,(1S,2'R,6S,7aS)-4-[(acetyloxy)methyl]-6,7a-dihydro-1-(3-methyl-1-oxobutoxy)spiro[cyclopenta[c]pyran-7(1H),2'-oxiran]-6-ylester中药标准品  分 子 式: C24H32O10 分 子 量: 480.50488

ATX2  脊髓小脑2型蛋白抗体鸡屎藤苷甲酯Methyl (1s,4as,5s,7as)-1-(β-d-glucopyranosyloxy)-5-hydroxy-7-({[( Methylsulfanyl)carbonyl]oxy}methyl)-1,4a,5,7a-tetrahydrocyclopent A[c]pyran-4-carboxylate中药标准品  分 子 式: C19H26O12S 分 子 量: 478.46754

ATXN7L1  蛋白7样1抗体比枯枯灵bicucullin中药标准品  分 子 式: C20H17NO6 分 子 量: 367.36

ATXN7L2  蛋白7样2抗体长春质碱Catharanthine中药标准品  分 子 式: C21H24N2O2 分 子 量: 336.43

BCNP  B淋巴细胞新型蛋白1抗体汞色素脱色试剂盒标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

BEX4  脑表达X连锁蛋白4抗体三十烷醇Triacontan-1-ol中药标准品  分 子 式: C30H62O 分 子 量: 438.81268