PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

大肥菇Monkey GZMK (Granzyme K) ELISA Kit拉丁属名: Agaricus bitorquis

慢生根瘤菌Monkey TMPRSS2 (Transmembrane Protease, Serine 2) ELISA Kit 用途: 与花生共生固氮良好

球孢白僵菌Monkey MYD88 (Myeloid Differentiation Factor 88) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

解淀粉盐盒菌Monkey ALCAM (Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit拉丁属名: Haloarcula amylolytica

香菇Monkey BMPR2 (Bone Morphogenetic Protein Receptor II) ELISA Kit拉丁属名: Lentinula  edodes

异常汉逊酵母异常变种Monkey TNNC2 (Troponin C Type 2) ELISA Kit 拉丁属名: Hansenula  anomala var. anomala

荣州假黄单胞菌Monkey TSH (Thyroid Stimulating Hormone) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudoxanthomonas  yeongjuensis

钉斑链霉菌Monkey AChRab (Acetylcholine Receptor Antibody) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces clavifer

赭盖红菇Monkey FGF9 (Fibroblast Growth Factor 9) ELISA Kit 用途: 可食用，与松、云杉等树木形成外生菌根

球孢枝孢Monkey TPS (Tissue Polypeptide Specific Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Cladosporium sphaerospermum

芽枝状枝孢Monkey IgG1 (Immunoglobulin G1) ELISA Kit拉丁属名: Cladosporium cladosporioides

金黄色葡萄球菌 Monkey PDHα (Pyruvate Dehydrogenase Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Staphylococcus aureus

新月弯孢Monkey Anti-AChR (Anti-Acetylcholine Receptor Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Curvularia lunata

酿酒酵母Monkey ARHGDIα (Rho GDP Dissociation Inhibitor Alpha ) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

耐赖氨酸芽孢杆菌Monkey CDK6 (Cyclin Dependent Kinase 6) ELISA Kit拉丁属名: Lysinibacillus  boronitolerans
单纯病毒2型探针法荧光定量PCR试剂盒 TPTE  /睾丸抗原44抗体愈创甘油醚3-(2-Methoxyphenoxy)-1,2-propanediol中药标准品  分 子 式: C10H14O4 分 子 量: 198.22

ALDH16A1  乙醛脱氢酶16家庭A1抗体莫诺苷Morroniside中药标准品  分 子 式: C17H26O11 分 子 量: 406.38

ALG11  天门冬酰胺连接糖基化11抗体矢车菊素-3-O-葡萄糖苷Cyanidin-3-glucoside chloride中药标准品  分 子 式: C21H21ClO11 分 子 量: 484.84

ALS2CR4  肌萎缩侧索硬化症相关蛋白4抗体当归酸酐2-Butenoic acid,2-methyl-, anhydride, (2Z,2'Z)-中药标准品  分 子 式: C10H14O3 分 子 量: 182.21636

AMIGO3  粘附分子IgG样结构域蛋白3抗体脱氢雌马酚3-(4-Hydroxyphenyl)-2H-chromen-7-ol中药标准品  分 子 式: C15H12O3 分 子 量: 240.25398

AMN1  细胞核重定位及纺锤体检查点蛋白AMN1抗体Earle's平衡盐粉剂(1×EBSS,无钙镁糖酚红)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ANKRD11  锚蛋白重复结构域蛋白11抗体庆大霉素硫酸盐Gentamycin Solution化学标准品 分 子 式: C21H43N5O7.H2O4S 分 子 量: 575.6739