PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

赭鳞蘑菇Monkey S100A12 (S100 Calcium Binding Protein A12) ELISA Kit用途: 可食、药菌

产气肠杆菌Monkey ICAM-4 (Intercellular Adhesion Molecule-4) ELISA Kit 拉丁属名: Enterobacter aerogenes

簇生黄韧伞Monkey EG-VEGF (Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor)ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

粉红单端孢Monkey PSA/KLK3 (Prostate Specific Antigen) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

灰树花Monkey CX26 (Connexin 26) ELISA Kit 用途: 食用菌

大肠埃希氏杆菌Monkey P-CK (Pan-Cytokeratin) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia  coli

华丽侧耳（佛罗里达侧耳）Monkey C/EBPδ (CCAAT/Enhancer Binding Protein, Delta) ELISA Kit拉丁属名: Pleurotus floridanus

蘑菇Monkey MCSFR (Macrophage Colony Stimulating Factor Receptor) ELISA Kit用途: 食用

红冬孢酵母Monkey CAPA (Cytotoxin Associated Protein A) ELISA Kit拉丁属名: Rhodosporidium toruloides

 寇氏隐甲藻Monkey OBTF4 (Octamer Binding Transcription Factor 4) ELISA Kit拉丁属名: Crypthecodinium cohnii

三叶草根瘤菌Monkey NTRK2 (Neurotrophic Tyrosine Kinase Receptor Type 2 ) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠埃希氏菌Monkey PCDH15 (Protocadherin 15) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

灵芝Monkey SIGLEC1 (Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

肠膜明串珠菌Monkey DAP6 (Death Associated Protein 6) ELISA Kit拉丁属名: Leuconostoc mesenteroides

假单胞菌Monkey VIM (Vimentin) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas yamanorum
病毒通用型探针法荧光定量PCR试剂盒 TBRG4  转化生长因子β调节蛋白4抗体伪石蒜碱1H-Pyrrolo[3,2,1-de]phenanthridine-1,2,10-triol,2,4,5,7,11b,11c-hexahydro-9-methoxy-, (1S,2S,11bS,11cS)-化学标准品 分 子 式: C16H19NO4 分 子 量:

TLK2  丝氨酸/苏氨酸激酶TLK2抗体木兰脂素Magnoline中药标准品  分 子 式: C36H40N2O6 分 子 量:

ANKRD28  锚蛋白重复域28抗体前胡香豆素E2-Butenoic acid,2-methyl-,(9R)-9,10-dihydro-8,8-dimethyl-2,10-dioxo-2H,8H-benzo[1,2-b:3,4-b']dipyran-9-ylester, (2E)- (9CI)化学标准品 分 子 式: C19H18O6 分 子 量:

SIPA1L2  信号诱导增殖相关蛋白1样蛋白2抗体西红柿碱Tomatine中药标准品  分 子 式: C50H83NO21 分 子 量: 1034.18812

DUSP7  双特异性蛋白磷酸酶7抗体补骨脂香豆素AFicusin A对照药材 分 子 式: C25H24O5 分 子 量: 404.45506

PPM1B  蛋白质磷酸酶1B抗体（PP2Cβ）western转移缓冲液(5×,尼龙膜)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PPM1G  蛋白质磷酸酶1G抗体（PP2Cγ）北美芹素2-Butenoic acid,2-methyl-,(9R,10R)-9-(acetyloxy)-9,10-dihydro-8,8-dimethyl-2-oxo-2H,8H-benzo[1,2-b:3,4-b']dipyran-10-ylester, (2Z)-中药标准品  分 子 式: C21H22O7 分 子 量: 386.39518