PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

耳匙菌Monkey C2 (Complement Component 2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

耐寒短杆菌Monkey MYH9 (Myosin Heavy Chain 9, Non Muscle) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

异常汉逊酵母Monkey SMN1(Survival of Motor Neuron 1, Telomeric) ELISA Kit 用途: 啤酒酿造(北啤2号)

枯草芽孢杆菌Monkey SOX2 (Sex Determining Region Y Box Protein 2) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis

芥黄蜜环菌Monkey CKLFSF4 (Chemokine Like Factor Superfamily 4) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种Monkey TFR2 (Transferrin Receptor 2) ELISA Kit  注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

贝莱斯芽胞杆菌Monkey PKB (Protein Kinase B) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus velezensis

围小丛壳菌Monkey PEDF (Pigment Epithelium Derived Factor ) ELISA Kit 用途: 植物病原物，用于种群的遗传学研究和炭疽病害的诊断和防治

镰孢霉Monkey PYGM (Glycogen Phosphorylase, Muscle) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

 Winogradskyella pulchriflava Monkey UPP1 (Uridine Phosphorylase 1) ELISA Kit拉丁属名: Winogradskyella pulchriflava

比阿娄维扎青霉 Monkey ADH (Antidiuretic Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium saturniforme

枯草芽孢杆菌Monkey PLA2G2A (Phospholipase A2, Group II A) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

黑腐皮壳Monkey CA4 (Carbonic Anhydrase IV) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

解脂假丝酵母Monkey C3c (Complement C3 Convertase) ELISA Kit拉丁属名: Candida  lipolytica

洛格酵母Monkey AFGF/FGF1 (Acidic Fibroblast Growth Factor 1) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  logos
病毒C型探针法荧光定量PCR试剂盒说明书Cyclin B3  周期素B3抗体栀子醛Cerbinal对照药材 分 子 式: C11H8O4 分 子 量: 204.17882

CCNDBP1/GCIP  周期素D结合蛋白1抗体草酸水溶液(1%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

AFF4  淋巴细胞相关AF4样蛋白抗体硫秋水仙苷Thiocolchicoside中药标准品  分 子 式: C27H33NO10S 分 子 量: 563.61662

Cyclin K/CCNK  周期素K抗体雷醌内酯酮Phenanthro[1,2-c]furan-1,6,9(3H)-trione,3b,4,5,9b,10,11-hexahydro-9b-methyl-7-(1-methylethyl)-, (3bR,9bS)- (9CI)对照药材 分 子 式: C20H22O4 分 子 量:

Cyclin L/CCNL1  周期素L抗体紫草呋喃AShikonofuran A中药标准品  分 子 式: C18H20O5 分 子 量: 316.3571

CCNYL1  周期素样Y1抗体丹参酮IIATanshinone IIA中药标准品  分 子 式: C19H18O3 分 子 量: 294.33

Cyclin J  周期素J抗体枸橘苷Isosakuranetin-7-O-neohesperidoside中药标准品  分 子 式: C28H34O14 分 子 量: 594.56116