PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

白地霉Monkey CTAGE (Cutaneous T-Cell Lymphocyte Associated Antigen) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

柱孢犁头霉Monkey ATF-5 (Activating Transcription Factor 5) ELISA Kit拉丁属名: Absidia cylindrospora

土生类诺卡氏菌Monkey MGST1 (Microsomal Glutathione S Transferase 1) ELISA Kit 拉丁属名: Nocardioides  terrigena

香豌豆束茎病菌Monkey MMP-25 (Matrix Metalloproteinase 25) ELISA Kit用途: Produces 5'-nucleotides by cell culture on hydrocarbons and subsequent degradation of intracellular RNA at alkaline pH (U.S. Pat. 3,652,395).

绿粘帚霉Monkey OCLN (Occludin) ELISA Kit  注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽胞杆菌Monkey TNC (Tenascin C) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

柠檬色短小杆菌Monkey EPP (Erythrocyte Protoporphyrin) ELISA Kit拉丁属名: Curtobacterium  citreum

镰刀菌Monkey IgA1 (Immunoglobulin A1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

猪丝菌Monkey MSTN (Myostatin) ELISA Kit拉丁属名: rhuriopathiae

酿酒酵母Monkey EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

苏云金芽胞杆菌Monkey UFC (Urinary Free Cortisol) ELISA Kit用途: 用于抗虫基因的分离和抗虫相关基础研究。

盘长孢状刺盘孢Monkey PDGFC (Platelet Derived Growth Factor C) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌Monkey GPR120 (G Protein Coupled Receptor 120) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

异常汉逊酵母Monkey CFB (Complement Factor B) ELISA Kit 拉丁属名: Hansenula  anomala

枯草芽孢杆菌Monkey COL17 (Collagen Type XVII) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis
病毒B型探针法荧光定量PCR试剂盒 MRP8+MRP14  多药耐药相关蛋白8/9/14抗体槐黄醇Sophoflavescenol化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

NEU4  神经氨酸酶4抗体香蒲新苷Typhaneoside中药标准品  分 子 式: C34H42O20 分 子 量: 770.68

PPHLN1  脉周蛋白1抗体（抗原蛋白Ga50）异莪术呋喃二烯Cyclodeca[b]furan,4,7,8,11-tetrahydro-3,6,10-trimethyl-, (5E,9E)-对照药材 分 子 式: C15H20O 分 子 量: 216.3187

S100 alpha 2  S100A2抗体甲基条叶蓟素; 泽兰黄素4,5-Dihydroxy-3,6,7-trimethoxyflavone化学标准品 分 子 式: C18H16O7 分 子 量: 344.31544

SART1  T淋巴细胞识别的抗原抗体月桂酸Lauric acid其它化学试剂 分 子 式: C12H24O2 分 子 量: 200.32

SCEL  SCEL蛋白抗体通关藤苷ITenacissoside I中药标准品  分 子 式: C44H62O14 分 子 量:

SPAG8  精子相关抗原8抗体枯名醛4-Isopropylbenzaldehyde化学标准品 分 子 式: C10H12O 分 子 量: 148.20168