PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

威斯康星米勒菌Monkey GLα (Galactosidase Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Moellerella wisconsensis

大靑湖金黄杆菌Monkey FRS3 (Fibroblast Growth Factor Receptor Substrate 3) ELISA Kit 拉丁属名: Chryseobacterium  daecheongense

塔宾曲霉Monkey M-AChR M3 (Muscarinic Acetylcholine Receptor M3) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  tubingensis

葡萄暗拟棒束梗霉Monkey PAI2 (Plasminogen Activator Inhibitor 2 )ELISA Kit 拉丁属名: Phaeoisariopsis vitis (Lév.) Sawada

中国汉纳酵母Monkey CA6 (Carbonic Anhydrase VI) ELISA Kit拉丁属名: Hannaella sinensis

沙福芽孢杆菌Monkey FPB (Fibrinopeptide B) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus safensis

大豆慢生根瘤菌Monkey CK-17/KRT17 (Cytokeratin 17) ELISA Kit用途: 与大豆共生固氮,培养基pH4.5生长

希瓦氏菌*Monkey pIκBα (Phospho-Inhibitory Subunit Of NF Kappa B Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Shewanella putrefaciens

白乳菇Monkey MAN1A1 (Mannosidase Alpha Class 1A Member 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

Termitomyces bulborhizus Monkey MLCK/MYLK (Myosin Light Chain Kinase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

白假丝酵母Monkey CTSC (Cathepsin C) ELISA Kit拉丁属名: Candida albicans

米根霉Monkey SIGLEC12 (Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 12) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus oryzae Went et Prinsen-Geerligs

鸡毒、滑液支原体（-）阴性血清Monkey AMY1 (Amylase Alpha 1, Salivary) ELISA Kit规格: 0.5ml

耐冷冷杆菌Monkey iPLA2 (Phospholipidase A2, Calcium Independent) ELISA Kit拉丁属名: Cryobacterium  psychrotolerans

臭曲霉Monkey CNTN3 (Contactin 3) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus  foetidus
螺杆菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒 phospho-NUDC(Ser326)  磷酸化细胞核分离基因C蛋白抗体茄尼醇solanesol中药标准品  分 子 式: C45H74O 分 子 量: 631.06846

NUP160  核孔蛋白NUP160抗体马兜铃内酰胺BIIIDibenz[cd,f]indol-4(5H)-one,1,2,9-trimethoxy- 化学标准品 分 子 式: C18H15NO4 分 子 量: 309.316

Ninein/GSK3B interacting protein  GSK3B相互作用蛋白抗体地黄苷Martynoside对照药材 分 子 式: C31H40O15 分 子 量: 652.6403

RASSF7  RAS家族关联结构域蛋白7抗体磺胺醋酰N-((4-Aminophenyl)sulfonyl)acetamide 高端化学试剂 分 子 式: C8H10N2O3S 分 子 量: 214.2416

SKA1  纺锤体和着丝粒相关蛋白1抗体钩吻素子7,20(2H,19H)-Cyclovobasan, 1,2,18,19-tetradehydro-3,17-epoxy-, (3R,7alpha,20alpha)-中药标准品  分 子 式: C20H22N2O 分 子 量: 306.40148

SKA2  纺锤体和着丝粒相关蛋白2抗体黄芩苷Baicalin中药标准品  分 子 式: C21H18O11 分 子 量: 446.36

SKA3  纺锤体和着丝粒相关蛋白3抗体马兜铃内酰胺AAdenosine,2'-deoxy-N-(5,6-dihydro-8-methoxy-5-oxobenzo[f]-1,3-benzodioxolo[6,5,4-cd]indol-7-yl)-化学标准品 分 子 式: C27H22N6O7 分 子 量: 542.49958