PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

黄赭色链霉菌Monkey αHBDH (α-Hydroxybutyrate Dehydrogenase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠杆菌Monkey LH (Luteinizing Hormone) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

椭圆酿酒酵母Monkey PI (Proinsulin) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cervisiae Hansen var. ellipsoideus (Hansen) Dekker

空泡盐红菌Monkey PAFAHIB3 (Platelet Activating Factor Acetylhydrolase Ib3) ELISA Kit 拉丁属名: Halorubrum vacuolatum

黑曲霉Monkey NFKBIE (Nuclear Factor Of Kappa Light Polypeptide Gene Enhancer In B-cells Inhibitor Epsilon) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus niger

大肠埃希菌Monkey CSF2Rβ (Colony Stimulating Factor 2 Receptor Beta) ELISA Kit 拉丁属名: coli

侧孢短芽胞杆菌Monkey GAP (GTPase Activating Protein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

淡紫拟青霉Monkey Bcl-3 (B-cell Leukemia/Lymphoma 3) ELISA Kit 用途: 用作生物防治研究

小平菇（秀珍菇）Monkey C1r (Complement Component 1R) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

根瘤菌Monkey AFP-L3 (Alpha-Fetoprotein Lens Culinaris Agglutinin 3) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

豌豆根瘤菌Monkey LTβR (Lymphotoxin Beta Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Rhizobium leguminosarum

大肠杆菌Monkey STAT6 (Signal Transducer and Activator of Transcription 6) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

吸水链霉菌Monkey DPP10 (Dipeptidyl Peptidase X) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces hygroscopicus (Jensen) Waksman et Henrici

热带假丝酵母Monkey TEP1 (Telomerase Associated Protein 1) ELISA Kit用途: 水解液发酵用菌

顶孢头孢霉Monkey AKAP1 (A Kinase Anchor Protein 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
幼禽螺杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书RINT1  胞膜间内质网调节蛋白1抗体三苯基氯化锡Chlorotriphenyltin化学标准品 分 子 式: C18H15ClSn 分 子 量: 385.46

RMND1  减数分裂同源蛋白1抗体TMB显色液(组化或膜HRP)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

SGTA  小谷氨酰胺三角四肽重复区蛋白α抗体车叶草苷Asperuloside中药标准品  分 子 式: C18H22O11 分 子 量: 414.36068

SUGT1  SUGT1蛋白抗体蜕皮甾酮-20,22-单丙酮化物Cholest-7-en-6-one,2,3,14,25-tetrahydroxy-20,22-[(1-methylethylidene)bis(oxy)]-, (2b,3b,5b,22R)-对照药材 分 子 式: C30H48O7 分 子 量: 520.69792

APC6/CDC16  细胞分裂周期蛋白16抗体对叶百部碱Tuberostemonine中药标准品  分 子 式: C22H33NO4 分 子 量: 375.50172

phospho-APC6/CDC16(Ser560)  磷酸化细胞分裂周期蛋白16抗体1,2-O-异亚丙基-beta-D-吡喃果糖(5S,8R,9R,10S)-2,2-Dimethyl-1,3,6-trioxaspiro[4.5]decane-8,9,10-triol对照药材 分 子 式: C9H16O6 分 子 量: 220.21974

Borealin/CDCA8  细胞分裂周期蛋白8抗体柚皮素三甲醚5,7-Dimethoxy-2-(4-methoxyphenyl)chroman-4-one对照药材 分 子 式: C18H18O5 分 子 量: 314.33252