PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

pHY300PLKMonkey APCR (Activated Protein C Resistance) ELISA Kit拉丁属名: 宿主：DH5α，BL21

Enterobacter cowaniiMonkey γ-ECS (γ-Glutamyl Systeine Synthetase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大豆慢生根瘤菌Monkey SOX18 (Sex Determining Region Y Box Protein 18) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母Monkey 5-HIAA (5-Hydroxyindolacetic Acid) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces Cerevisiae

白蘑Monkey MMP-1 (Matrix Metalloproteinase 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠埃希菌Monkey COL5α2 (Collagen Type V Alpha 2) ELISA Kit  拉丁属名: coli

缺陷短波单胞菌Monkey GDNF (Glial Cell Line Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit拉丁属名: Brevundimonas diminuta

沙雷氏菌Monkey LUM (Lumican) ELISA Kit拉丁属名: Serratia  sp.

银耳、白木耳（可订购）Monkey ERK3 (Extracellular Signal Regulated Kinase 3) ELISA Kit拉丁属名: Tremella fuciformis Berk.

产气肠杆菌Monkey HbA1c (Glycosylated Hemoglobin/Hemoglobin A1c) ELISA Kit拉丁属名: Enterobacter  aerogenes

小串链霉菌Monkey CLDN4 (Claudin 4) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces catenulae

破试验毒素Monkey GPX1 (Glutathione Peroxidase 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母Monkey TPO-Ab (Anti-Thyroid-Peroxidase Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

印度农霉菌Monkey ACD (Adrenocortical Dysplasia Homolog) ELISA Kit拉丁属名: Agromyces indicus

塔宾曲霉Monkey LP-a (Lipoprotein a) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus tubingensis
柏氏血矛线虫探针法荧光定量PCR试剂盒规格APRIN/PDS5B  雄激素诱导增殖抑制蛋白抗体SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

REC8  减数分裂重组蛋白家族REC8抗体薄荷醇(1R,2S,5R)-2-Isopropyl-5-methylcyclohexanol脂肪酸类 分 子 式: C10H20O 分 子 量: 156.2652

SA1/Nuclear protein stromal antigen 1  粘结蛋白SA1抗体茯苓新酸APoricoic acid A化学标准品 分 子 式: C31H46O5 分 子 量: 498.69394

SA2  粘结蛋白SA2抗体苦马豆素1,2,8-Indolizinetriol,octahydro-, (1S,2R,8R,8aR)-中药标准品  分 子 式: C8H15NO3 分 子 量: 173.2096

phospho-REC8(Ser251)  磷酸化减数分裂重组蛋白家族REC8抗体9R-10alpha-羟基表藤黄酸9R-10alpha-Hydroxyepigambogic acid化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

SMC2  染色体结构维持蛋白2抗体邻苯二甲酸丁苄酯Benzyl butyl phthalate化学标准品 分 子 式: C19H20O4 分 子 量: 312.3597

SMC4  染色体结构维持蛋白4抗体补骨脂酚4-(3,7-Dimethyl-3-vinylocta-1,6-dien-1-yl)phenol中药标准品  分 子 式: C18H24O 分 子 量: 256.38256