PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

链霉菌Monkey cADPRH/CD38 (Cyclic ADP Hydrolase) ELISA Kit用途: 具有一定杀虫活性。

根瘤杆菌属Monkey NF (Neurofilament) ELISA Kit拉丁属名: Rhizobacter? dauci

米曲霉Monkey VEGFR-2/KDR (Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  oryzae

萨氏艾美耳球虫Monkey AGA (Anti-Gliadin Antibody) ELISA Kit拉丁属名: saitamae

平菇Monkey IGF-2 (Insulin Like Growth Factor 2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

不解糖鞘氨单胞菌Monkey STAT6B (Signal Transducer and Activator of Transcription 6B) ELISA Kit 拉丁属名: Sphingomonas asaccharolytica

扩展青霉Monkey C4a (Complement Component 4a) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

斐济球腔菌Monkey EFNA3 (Ephrin A3) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

鼠李糖乳杆菌Monkey NAGLU (N-Acetyl Alpha-D-Glucosaminidase) ELISA Kit 拉丁属名: Lactobacillus rhamnosus

红色红曲Monkey SPOP (Speckle Type POZ Protein) ELISA Kit 拉丁属名: Monascus  ruber

阿穆尔斯克湾盐地杆菌Monkey MMP-12 (Matrix Metalloproteinase 12) ELISA Kit拉丁属名: Salinibacterium  amurskyense

柴油食烷菌Monkey CDK8 (Cyclin Dependent Kinase 8) ELISA Kit拉丁属名: Alcanivorax dieselolei

金孢霉属Monkey EFNA5 (Ephrin A5) ELISA Kit 拉丁属名: Geomyces  sp.

浅紫灰直丝链霉菌Monkey TNNI2 (Troponin I Type 2, Fast Skeletal) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces lavendularectus

枯草芽孢杆菌枯草亚种Monkey TP (Thymidine Phosphorylase) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis subsp. spizizenii
三代虫探针法荧光定量PCR试剂盒供应商CENPP  着丝粒蛋白P抗体表莪术呋喃烯酮Epicurzerenon化学标准品 分 子 式: C15H18O2 分 子 量: 230.302

PCNT/Pericentrin  中心粒周蛋白抗体过氧麦角甾醇Ergosta-6,22-dien-3-ol,5,8-epidioxy-, (3b,*,8a,22E)-对照药材 分 子 式: C28H44O3 分 子 量:

Importin4/RanBP4  核蛋白4抗体（Ran结合蛋白4）柚皮苷二氢查尔酮Naringin dihydrochalcone中药标准品  分 子 式: C27H34O14 分 子 量: 582.56

MIS12  染色体及有丝分裂蛋白MIS12抗体荜茇酰胺piperlongumine中药标准品  分 子 式: C17H19NO5 分 子 量: 317.33646

CDCA1/Nuf2  细胞分裂周期相关蛋白1抗体七叶皂苷Bβ-d-Glucopyranosiduronic acid, [3β,16α,21β(Z),22α]-22-(acetyloxy)-16,24,28-trihydroxy-21-[(2-methyl-1-oxo-2-butenyl)oxy]olean-12-en-3-yl O-β-d-glucopyranosyl-(1→2)-O-[β-d-glucopyranosyl-(1→4)]-中药标准品  分 子 式: C55H86O24 分 子 量: 1133.27

Importin 9/RanBP9  核蛋白9抗体（Ran结合蛋白M）盐肤木内酯 ARhuscholide A对照药材 分 子 式: C31H42O3 分 子 量: 462.66338

SPC25  纺锤体极点构成蛋白25抗体葫芦素IIACucurbitacin A化学标准品 分 子 式: C32H50O8 分 子 量: 562.7346