PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

猴头菌Monkey MLZE (Melanoma Derived Leucine Zipper Extra Nuclear Factor) ELISA Kit用途: 食用兼药用

镰刀菌Monkey RANTES (Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

草酸青霉Monkey E2 (Estradiol) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium oxalicum

冠突曲霉Monkey Lptn/XCL1 (Lymphotactin) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus cristatus

埃切假丝酵母Monkey TARS (Threonyl tRNA Synthetase, cytoplasmic) ELISA Kit拉丁属名: Candida etchellsii

酿酒酵母Monkey AT (AntiThrombin) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

乳菇属Monkey NUP155 (Nucleoporin 155kDa) ELISA Kit用途: 属外生菌根菌

泌液克里格范瑞吉酵母Monkey CENPB (Centromere Protein B) ELISA Kit拉丁属名: Kregervanrija fluxuum

大樱桃叶穿孔病*Monkey FOXP3 (Forkhead Box Protein P3) ELISA Kit 拉丁属名: Xanthomonas pruni

头状丝孢酵母Monkey F5 (Coagulation Factor V) ELISA Kit用途: 产脂肪酶

胶孢镰孢Monkey PKCδ1 (Protein Kinase C Delta ) ELISA Kit 拉丁属名: Fusarium subglutinans

浅紫灰链霉菌产色变种Monkey IL-19 (Interleukin 19) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces lavendulae var. chromogenes

酱油曲霉Monkey GLRX3 (Glutaredoxin 3) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  sojae

杂色曲霉Monkey PIINP (Procollagen II N-Terminal ProPeptide) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

猪丝菌Monkey NCAM/CD56 (Neural Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit 拉丁属名: rhuriopathiae
山羊痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒规格NRH2  死亡结构域蛋白NRH2抗体磺胺苯甲酰sulconazole nitrate化学标准品 分 子 式: C13H12N2O3S 分 子 量: 276.31

PGRPS  肽聚糖识别蛋白1抗体草夹竹桃苷Androsin中药标准品  分 子 式: C15H20O8 分 子 量: 328.3145

Porimin  前细胞胀亡受体诱导膜损伤蛋白抗体异补骨脂查尔酮2-Propen-1-one,1-[2,4-dihydroxy-3-(3-methyl-2-butenyl)phenyl]-3-(4-hydroxyphenyl)-, (2E)-中药标准品  分 子 式: C20H20O4 分 子 量:

TRAF7  受体相关因子7抗体6,8-二异戊二烯基柚皮素senegalensin化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

ZDHHC16  细胞凋亡调控蛋白ZDHHC16抗体焦地黄苯乙醇甙B1b-D-Glucopyranoside,2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)ethyl O-6-deoxy-a-L-mannopyranosyl-(1®3)-O-[b-D-galactopyranosyl-(1®6)]-, 4-[(2E)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-propenoate]化学标准品 分 子 式: C37H50O20 分 子 量: 814.780900000001

DR6/CD358  细胞调亡素/受体死亡受体6抗体睾酮Testosterone中药标准品  分 子 式: C19H28O2 分 子 量: 288.43

BCCIP/TOK1  易感基因2和p21蛋白抑制因子抗体白花前胡甲素Praeruptorin A中药标准品  分 子 式: HNO3- 分 子 量: 63.01284