PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

嗜脚动物咸海鲜球菌Monkey dDAVP (1-Desamino-8D-Arginine Vasopressin) ELISA Kit拉丁属名: Jeotgalicoccus pinnipedialis

硝酸盐还原嗜盐碱杆菌Monkey TARC (Thymus Activation Regulated Chemokine) ELISA Kit拉丁属名: Natronobacterium nitratireducens

栖土曲霉Monkey ACO1 (Aconitase 1) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  terricola

矩圆黑盘孢Monkey α-EP (α-Endomorphin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

孤岛海杆状菌Monkey ERK1 (Extracellular Signal Regulated Kinase 1) ELISA Kit拉丁属名: Marinobacter gudaonensis

嗜松篮状菌Monkey SPTAN1 (Alpha-Fodrin) ELISA Kit 拉丁属名: Talaromyces pinophilus

环状芽胞杆菌Monkey Methylase ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  circulans

植物乳杆菌植物亚种Monkey DPD (Deoxypyridinoline) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  plantarum subsp. plantarum

黑曲霉Monkey NAP3 (Neutrophil Activating Protein 3) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus niger

*樱桃链格孢Monkey KERA (Keratocan) ELISA Kit拉丁属名: Alternaria cerasi Potebnia

球孢白僵菌Monkey VE-Cadherin (Vascular Endothelial Cadherin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

亚历山大富盐菌Monkey CABIN1 (Calcineurin Binding Protein 1) ELISA Kit 拉丁属名: Haloferax alexandrinus

爪哇根霉Monkey GHAb (Anti-Growth Hormone Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus  javanicus

黑曲霉Monkey PGF (Placental Growth Factor) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  niger

栗疫菌Monkey ANGPTL1 (Angiopoietin Like Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Cryphonectria parasitica
血球链菌探针法荧光定量PCR试剂盒 TMUB1  跨膜和泛素样结构域蛋白1抗体香紫苏二醇1-(2-Hydroxyethyl)-2,5,5,8a-tetramethyldecahydronaphthalen-2-ol中药标准品  分 子 式: C16H30O2 分 子 量: 254.4082

NUP50  核孔蛋白50抗体5-羟基-4-甲氧基铁屎米酮Nigakinone对照药材 分 子 式: C16H12N2O3 分 子 量: 280.27808

PDCD2L/MGC13096  程序性细胞死亡2抗体楮树黄酮醇F4H-1-Benzopyran-4-one,3,5,7-trihydroxy-2-[4-hydroxy-3-(3-methyl-2-buten-1-yl)phenyl]-8-(3-methyl-2-buten-1-yl)-化学标准品 分 子 式: C25H26O6 分 子 量:

SLTM  转绿调节因子SLTM抗体桑辛素 M5-(6-hydroxy-1-benzofuran-2-yl)benzene-1,3-diol化学标准品 分 子 式: C14H10O4 分 子 量: 242.2268

GPR65  G蛋白偶联受体65抗体草酸洗液(10%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

AX2R/LOC389289  膜粘连蛋白2受体抗体丹参新醌B2-Isopropyl-3-hydroxy-8-methyl-phenanthrachinon-(1.4)化学标准品 分 子 式: C18H16O3 分 子 量: 280.318

NADE/NGFRAP1  神经生长因子受体相关蛋白1抗体龙胆黄碱6-methyl-1-oxo-3,4,6,7-tetrahydro-1H-pyrano[3,4-c]pyridine-5-carbaldehyde化学标准品 分 子 式: C10H11NO3 分 子 量: 193.19924